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磁珠法糞便提取試劑盒操作指南

瀏覽次數:1361 發布日期:2021-1-7  來源:本站 僅供參考,謝絕轉載,否則責任自負
 

常規樣本的核酸提取

想必已不再是實驗黨們頭疼的對象了吧

然鵝,糞便基因組DNA提取步驟實在繁瑣

還可能遇到提取濃度低,純度差等問題

簡直天崩地裂啊

沒關系,這點小事MP幫你解決!

拿好這份指南

讓你的糞便DNA提取實驗事半功倍
 

 【 一圖了解提取步驟 】
 

【 PART 01-預洗 】
 
預洗是雜質去除的關鍵步驟,由于糞便樣本中可能含有多種可溶性雜質,如膽紅素、膽汁鹽、腐殖酸、植物源性多糖等。對于成分復雜的糞便樣本,倘若不進行預洗,這些雜質會在細胞及菌體裂解后,混合在釋放的核酸中,并與核酸競爭性結合磁珠,雜質與磁珠結合后,在洗脫時與磁珠分離,導致洗脫的DNA有顏色,純度低。
 

預洗操作

1.向Lysing Matrix E管中加入樣本,再加入1mL Pre-wash Buffer,用渦旋震蕩儀渦旋至糞便樣本被完全重懸起來。

2.因糞便狀態而異,渦旋時間控制在1min以內,時間過長會導致一部分細胞或菌體破裂,損失一部分DNA。

3.12000rpm,離心5min,棄去上清,保留沉淀。


除了按照預洗操作執行以外,對于各類型的樣本也會有不同注意事項:
 



【 PART 02-裂解與去雜 】

裂解:樣本預洗后,向Lysing Matrix E中依次加入裂解液的三種成分:Lysis Buffer F1、Lysis Buffer F2、RNase A,渦旋混勻。
使用FastPrep-24TM 5G研磨儀,5 m/s,研磨40s或用渦旋震蕩儀以最大速度渦旋10 min,離心后保留上清液,棄去沉淀。
 

去雜質:將上清液轉移到新的離心管中,添加去雜劑:PPS,主要用于去除蛋白等雜質。在4℃放置5 min能提高效果,離心后,保留上清液,棄去沉淀。
 

【 PART 03-結合-漂洗-洗脫 】

圖 |磁珠法提取
 

這三個步驟可以手工操作,也可以配合自動化核酸提取儀實現自動化批量操作。一般來說,手工提取預計在40-45 min左右完成,采用MP公司的24孔磁力架(貨號 116570413),可以一次處理24個樣本。而采用自動化儀器提取,隨著樣本數量的增加,操作時間并不延長,樣品處理量成倍增加,效率大大提高,從此解放雙手。
 


圖 |24孔磁力架

手工操作






自動化操作
1. 將400 µL上清液轉移至 96 孔板從左至右的第二列中,并按照下表在各添加其他試劑。 


2. 按照下表設置程序,運行自動化核酸提取儀。


【 訂購信息 】



如有任何技術問題,歡迎來電咨詢400-1500-680或添加官方微信:MPBiomedicalsSH,
我們可以根據您的實驗需求,提供定制化解決方案~

發布者:安倍醫療器械貿易上海有限公司
聯系電話:400-1500-680
E-mail:custserv.cn@mpbio.com

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