動物細胞糖蛋白高碘酸希爾法阿爾新藍染色試劑盒產品說明書（中文版）

主要用途

動物細胞糖蛋白高碘酸希爾法阿爾新藍染色試劑是一種旨在通過阿爾新藍和高碘酸希爾方法的結合，完整互補地分析細胞樣品中蛋白多糖（糖蛋白）成分的權威而經典的技術方法。該技術經過精心改良傳統方法、成功實驗證明的。主要適用于各種動物培養細胞中的糖蛋白成分，尤其是酸性和中性粘多糖蛋白檢測。產品即到即用，操作簡捷，性能穩定，顯色清晰。

技術背景

阿爾新藍（alcian blue）染料是一種水溶性的銅酞菁基團（cuprophthalocyanine group）的堿性染料。由于分子中銅的存在，而呈現藍色。在低pH的環境下，阿爾新藍與多價陰離子硫酸化（sulfated）和羧化（carboxylated）自由基的多價陰離子反應，例如酸性粘多糖蛋白（acidic mucopolysaccharide）、唾液粘多糖蛋白（sialomucins）以及糖蛋白，和酸性基團形成鹽鍵（salt linkage），呈現（通常高碘酸希爾法陰性）藍色。高碘酸（periodic acid）可以氧化糖蛋白中的多糖（polysaccharide）糖基，包括乙二醇（1,2-glycol）中的碳原子，成為乙醛基團（aldehyde group），與希爾試劑（Schiff’s Reagent），即品紅亞硫酸鹽染料（fuchsin sulfite）發生反應，呈現品紅色（magenda）或紫紅色，表明中性粘多糖蛋白陽性。

產品內容

清理液（Reagent A）  100毫升

酸性液（Reagent B）   10毫升

染色液A（Reagent C）   10毫升

氧化液（Reagent D）   10毫升

染色液B（Reagent E）   10毫升

產品說明書    1份

保存方式

保存在室溫下；染色液A（Reagent C）和染色液B（Reagent E），嚴格密封瓶口，避免光照；試劑具有腐蝕性，注意操作安全；有效保證6月

用戶自備

通用型蘇木素復染試劑盒（80067.1）：用于常規染色后復染

光學顯微鏡：用于細胞染色后觀察分析

實驗步驟

操作一：細胞載玻片染色

一、樣本阿爾新藍染色處理

• 取出待測的細胞載玻片或細胞涂片
• 小心加上200微升清理液（Reagent A）在載玻片或細胞涂片上，鋪滿整個樣品表面
• 小心移去載玻片或細胞涂片上的清理液（Reagent A）
• 小心加上200微升酸性液（Reagent B），鋪滿整個載玻片或細胞涂片樣品表面
• 室溫下孵育3分鐘
• 小心移去載玻片或細胞涂片上的酸性液（Reagent B）
• 小心加上200微升清理液（Reagent A）在載玻片或細胞涂片上，鋪滿整個樣品表面
• 小心移去載玻片或細胞涂片上的清理液（Reagent A）
• 重復實驗步驟7至8一次
• 小心加上200微升染色液A（Reagent C），鋪滿整個載玻片或細胞涂片樣品表面
• 室溫下孵育30分鐘；或直至可見藍色，避免光照
• 小心移去載玻片或細胞涂片上的染色液A（Reagent C）
• 小心加上200微升清理液（Reagent A）在載玻片或細胞涂片上，鋪滿整個樣品表面
• 小心移去載玻片或細胞涂片上的清理液（Reagent A）
• 重復實驗步驟13至14一次

二、樣本高碘酸希爾染色處理

• 小心加上200微升氧化液（Reagent D），鋪滿整個樣品表面
• 室溫下，孵育10分鐘
• 小心移去載玻片或細胞涂片上的氧化液（Reagent D）
• 小心加上200微升清理液（Reagent A）在載玻片或細胞涂片上，鋪滿整個樣品表面
• 小心移去載玻片或細胞涂片上的清理液（Reagent A）
• 重復實驗步驟4至5一次
• 小心加上200微升染色液B（Reagent E），鋪滿整個載玻片或細胞涂片樣品表面
• 室溫下孵育10分鐘；或直至可見深紅色，避免光照
• 小心移去載玻片或細胞涂片上的染色液B（Reagent E）
• 小心加上200微升清理液（Reagent A）在載玻片或細胞涂片上，鋪滿整個樣品表面
• 小心移去載玻片或細胞涂片上的清理液（Reagent A）
• 重復實驗步驟10至11一次

三、 （選擇步驟）樣本復染處理

• 樣本復染處理（建議使用通用型蘇木素復染試劑盒－80067.1）
• 放上蓋玻片或封片
• 即刻在一般光學顯微鏡下觀察：

酸性粘多糖蛋白――亮藍色

中性粘多糖蛋白和其它糖蛋白――品紅色

混合粘多糖蛋白――藍色或紫色

細胞核――深藍色（復染）

操作二：24孔細胞培養板染色

一、樣本阿爾新藍染色處理

• 小心抽去24孔細胞培養板里的培養液
• 小心加入400微升清理液（Reagent A），清洗生長中的細胞表面
• 小心抽去清理液（Reagent A）
• 小心加入400微升酸性液（Reagent B），覆蓋整個生長表面
• 室溫下孵育3分鐘
• 小心抽去酸性液（Reagent B）
• 小心加入400微升清理液（Reagent A），清洗細胞表面
• 小心抽去清理液（Reagent A）
• 重復實驗步驟7至8一次
• 小心加入400微升染色液A（Reagent C），鋪滿整個樣品表面
• 室溫下孵育30分鐘；或直至可見藍色，避免光照
• 小心抽去染色液A（Reagent C）
• 小心加入400微升清理液（Reagent A），鋪滿整個樣品表面
• 小心抽去清理液（Reagent A）
• 重復實驗步驟13至14一次

二、樣本高碘酸希爾染色處理

• 小心加入400微升氧化液（Reagent D），鋪滿整個樣品表面
• 室溫下，孵育10分鐘
• 小心抽去氧化液（Reagent D）
• 小心加入400微升清理液（Reagent A），鋪滿整個樣品表面
• 小心抽去清理液（Reagent A）
• 重復實驗步驟4至5一次
• 小心加入400微升染色液B（Reagent E），鋪滿整個樣品表面
• 室溫下孵育10分鐘；或直至可見深紅色，避免光照
• 小心抽去染色液B（Reagent E）
• 小心加入400微升清理液（Reagent A），鋪滿整個樣品表面
• 小心抽去清理液（Reagent A）
• 重復實驗步驟10至11一次

三、 （選擇步驟）樣本復染處理

• 樣本復染處理（建議使用通用型蘇木素復染試劑盒－80067.1）
• 即刻在一般光學顯微鏡下觀察：

酸性粘多糖蛋白――亮藍色

中性粘多糖蛋白和其它糖蛋白――品紅色

混合粘多糖蛋白――藍色或紫色

細胞核――深藍色（復染）

注意事項

• 本產品為50次（細胞載玻片）和25次（1個24孔板）操作
• 操作時，須戴手套
• 所有操作在室溫下進行
• 避免單純使用甲醛和乙醛等處理樣品；建議使用 Bouin固著液—12267
• 試劑可以重復使用
• 試劑具有腐蝕性，注意操作安全
• 試劑溶液避免細菌污染
• 染色液B（Reagent E）出現沉淀，可以溫熱、攪拌或過濾后使用
• 染色液B（Reagent E）須密封避光，如果變成紅色，則影響染色效果
• 試劑溶液在樣品表面時，避免有氣泡存在，同時確保鋪滿樣品表面
• 樣品染色避免過度，肉眼可見深藍或深紅色即可終止染色
• 如果檢測胞漿糖蛋白，需要進行樣品預處理，例如：甲醛熏蒸（formaldehyde vapor）；或無水甲醇固定15分鐘；或微波爐加熱染色45秒
• 可以使用通用型蘇木素復染試劑盒（80067.1），增強染色對比度
• 細胞染色完成后，即刻進行光學顯微鏡觀察 
• 本公司提供系列糖蛋白分析試劑產品

質量標準

• 本產品經鑒定性能穩定
• 本產品經鑒定顯色清晰