細胞馮庫薩（VON KOSSA）染色試劑盒產品說明書（中文版）

主要用途

細胞馮庫薩（VON KOSSA）染色試劑是一種旨在使用銀還原技術，分析固定處理的細胞樣本中鈣沉積現象的權威而經典的技術方法。該技術經過精心改良VON KOSSA方法、成功實驗證明的。主要適用于動物原生代或培養細胞的鈣沉積和鈣化結節檢測。廣泛用于骨細胞或組織病理生理的研究。產品嚴格無菌，即到即用，操作簡捷，性能穩定，顯色清晰。

技術背景

鈣鹽變化是骨細胞增殖分化和骨組織成骨潛能的標志之一。通過嗜銀染色，鈣離子受到強光還原，由金屬銀沉積取代，呈現黑色。

產品內容

清理液（Reagent A）  250毫升

固著液（Reagent B）   10毫升

染色液（Reagent C）   10毫升

平衡液（Reagent D）   10毫升

產品說明書    1份

保存方式

保存在4℃冰箱里；染色液（Reagent C），避免光照；有效保證6月

用戶自備

核固紅復染試劑盒（40011）：用于常規染色后復染

60瓦燈：用于還原鈣離子

小型染色缸：用于細胞染色操作

光學顯微鏡：用于細胞染色后觀察分析

實驗步驟

操作一：細胞載玻片染色

• 樣本固著處理
• 取出待測的細胞載玻片 
• 小心加上200微升清理液（Reagent A）在載玻片上，鋪滿整個樣品表面
• 小心移去載玻片上的清理液（Reagent A）
• 小心加上200微升固著液（Reagent B），鋪滿整個樣品表面
• 室溫下，孵育10分鐘
• 小心移去載玻片上的固著液（Reagent B）
• 小心加上200微升清理液（Reagent A），清洗樣品表面
• 小心移去載玻片上的清理液（Reagent A）
• 重復實驗步驟7至8一次

二、樣本染色處理

• 小心加上200微升染色液（Reagent C），鋪滿整個載玻片樣品表面
• 室溫下置于太陽光直射或60瓦燈直射孵育60分鐘；或直至可見黑色
• 小心移去載玻片上的染色液（Reagent C）
• 室溫下，小心將載玻片置入50毫升清理液（Reagent A）中孵育2分鐘
• 小心移去載玻片上的清理液（Reagent A）

三、 樣本復染處理

• 小心加上200微升平衡液（Reagent D）在載玻片上，鋪滿整個載玻片樣品表面
• 室溫下孵育5分鐘（注意：平衡液（Reagent D）具有褪色調節作用）
• 小心移去載玻片上的平衡液（Reagent D）
• 室溫下，小心將載玻片置入50毫升清理液（Reagent A）中孵育2分鐘
• 小心移去載玻片上的清理液（Reagent A）
• 樣本復染處理（核固紅）
• 放上蓋玻片或封片
• 即刻在一般光學顯微鏡下觀察：鈣沉積陽性細胞呈現黑色（如果復染：細胞質呈現粉紅色，細胞核呈現紅色）

操作二：24孔細胞培養板染色

一、樣本固著處理

1．小心抽去24孔細胞培養板里的培養液

2．每孔加入400微升清理液（Reagent A），清洗生長中的細胞表面

3．小心抽去每孔里的清理液（Reagent A）

4．每孔加入400微升固定液（Reagent B），覆蓋整個生長表面

5．在室溫下孵育10分鐘

6．小心抽去固定液（Reagent B）

7．每孔加入400微升清理液（Reagent A），清洗細胞表面

8．小心抽去清理液（Reagent A）

9．重復實驗步驟7和8兩次

二、樣本染色處理

• 小心加上400微升染色液（Reagent C），覆蓋整個生長表面
• 室溫下置于太陽光直射或60瓦燈直射孵育60分鐘；或直至可見黑色
• 小心抽去染色液（Reagent C）
• 室溫下，小心加入400微升清理液（Reagent A）
• 室溫下孵育2分鐘
• 小心抽去清理液（Reagent A）

三、 樣本復染處理

• 小心加上400微升平衡液（Reagent D），覆蓋整個生長表面
• 室溫下孵育5分鐘
• 小心抽去平衡液（Reagent D）
• 小心加入400微升清理液（Reagent A）
• 室溫下孵育2分鐘
• 小心抽去清理液（Reagent A）
• 樣本復染處理（核固紅）
• 即刻在一般光學顯微鏡下觀察：鈣沉積陽性細胞呈現黑色（如果復染：細胞質呈現粉紅色，細胞核呈現紅色）

注意事項

• 本產品為50次（細胞載玻片）和25次（1個24孔板）操作
• 操作時，須帶手套
• 所有操作在室溫下進行
• 試劑溶液在樣品表面時，避免有氣泡存在，同時確保鋪滿樣品表面
• 樣品染色避免過度，肉眼可見黑色即可終止染色
• 建議使用核固紅復染試劑盒（40011），增強染色對比度
• 細胞染色完成后，即刻進行光學顯微鏡觀察 
• 本公司提供系列組織細胞金屬元素染色試劑產品

質量標準

• 本產品經鑒定性能穩定
• 本產品經鑒定顯色清晰