對于新一代測序，待測樣品的質量和濃度，是文庫成功構建的兩個非常關鍵因素，也是新一代測序成功與否的關鍵。它可以最大程度上減小序列的偏差，并且輸出可靠的序列信息。嚴格把關送測樣品的濃度和質量，是確保新一代測序的數據準確、以及高通量的關鍵。

紫外可見光全光譜掃描的微量模式

定量核酸的濃度是借助吸光度值來判斷的。核酸的吸收峰是在260nm，在該波長下的吸光度值可以直接通過朗伯比爾定律計算得到濃度值。吸光度值還可以提示樣品的污染情況，依據不同的物質混合在核酸溶液中造成吸收光譜中臨近260nm的位置發生變化。

對于基因組和蛋白質組學，超微量測量方式以測量快速，節省樣品（1ul或更少）更加受到科研人員的青睞。而且省去了稀釋樣品的環節。

定量核酸260nm的吸收峰值來判斷樣品濃度，但無法做到區分核酸的種類。例如ssDNA, RNA, 寡核苷酸，這些物質都會作為目標dsDNA的污染物存在，并直接導致測量時260nm下的吸光度值增加，從而導致目標dsDNA的濃度值被高估。所以紫外吸收法只針對于純化的樣品。

熒光定量方法

熒光定量方法是用熒光基團有選擇性的結合目標生物分子的性能來實現的。當熒光結合在靶標上之后，熒光的強度即代表靶標的濃度。

基于這種原理，將發射出來的熒光強度直接和溶液中生物分子的濃度相關聯。通過將熒光試劑與已知濃度的樣品混合，然后測量其相對熒光當量（RFU），建立起一條濃度和RFU相對應的標準曲線。那么，將待測樣品同樣和熒光試劑進行混勻，檢測到的熒光信號RFU和標準曲線進行比對，得到待測樣品的準確濃度。熒光試劑的特異性，是熒光法檢測樣品濃度的關鍵。保證研究者得到的數據是靶標樣品的準確濃度。

由于熒光基團具有非常高的消光系數，熒光法通常更加精確。使用DeNovix 公司DS-11FX和dsDNA定量分析試劑盒，可以檢測到低至0.5 pg/uL的dsDNA母液樣品。這比紫外吸收法的測量下限降低了1000多倍。這個方法使測量的靈敏度顯著提高。

絕大多數的新一代測序服務商，都會建議客戶使用熒光試劑盒對送測樣品進行定量，如DeNovix，PicoGreen，Qubit等。這些試劑盒中的染料特異性的結合在dsDNA結構上，不會和其他核酸結合，從而保證得到的數值是溶液中dsDNA的準確濃度，不會受到其他物質的干擾。

樣品評估純度

除去精確定量濃度，還有一個重要的功能，就是排除潛在的酶抑制劑，如蛋白質，EDTA，苯，鹽離子還有多聚糖等，都會給后續的酶促反應帶來負面的影響。表現為降低產量，弱覆蓋率，甚至是文庫構建的失敗。超微量全光譜掃描UV-VIS建議用來監控樣品純度。通過評估260/280以及260/230的數值，樣品的純度以及混有的雜質種類即可知道。

結論

紫外可見光吸收法和熒光法雖然截然不同，但是都是進行樣品定量的黃金法則。對于新一代測序實驗室，結合熒光法和紫外吸收法，只需要很少的量（1uL），就可以確保研究者獲得樣品的濃度和質量信息。給后續實驗以指導。

為了滿足新一代測序實驗室的研究需求，美國DeNovix新款DS-11FX/FX+結合了超微量吸收法和熒光法兩種檢測模式。檢測能力覆蓋了目前最寬的樣品濃度范圍。只需要購買一臺儀器，即能滿足科研中，所有測量濃度的需求。已經成為新一代測序實驗室必備儀器。