iTRAQ(Isobaric Tag for Relative Absolute Quantitation)和TMT(Tandem Mass Tags)技術是分別由美國AB Sciex公司和Thermo公司研發的多肽體外標記定量技術。這兩種技術采用2-10種穩定同位素標簽,通過特異性 標記多肽的氨基基團,然后進行串聯質譜分析,可同時比較多達10種不同樣本中蛋白質的相對含量。
iTRAQ/TMT試劑由三部分組成:報告基團、平衡基團和反應基團。反應基團形成2-10種等質量同位素標簽。iTRAQ/TMT試劑標記酶解后的肽段,可與氨基酸N端及側鏈的伯胺基團發生反應。在一級譜圖中,來自于不同樣本的同一肽段,標記后表現為相同的質荷比。在二級譜圖中,報告基團、平衡基團和反應基團之間的鍵斷裂,帶不同同位素標簽的同一肽段產生質量不同的報告離子,根據報告離子的豐度可獲得樣本間相同肽段的定量信息,再經過軟件處理得到蛋白質的定量信息。其基本原理與技術流程如下圖所示:
Thermo Scientific Q Exactive/Thermo Scientific Q Exactive Plus/Thermo Scientific Orbitrap Fusion
平行比較2-10個樣本;蛋白通量高,覆蓋度高;可用于各種類型生物樣本。
各種脅迫、生理、病理條件下細胞、組織樣品中高通量蛋白表達譜分析
各種物種的蛋白質組草圖的構建
參考文獻
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相關技術服務:定量蛋白質組表達譜分析 iTRAQ/TMT