方案詳情：
一、實驗原理
試樣中的黃曲霉毒素Ｂ１用甲醇水溶液提取，經均質、渦旋、離心（過濾）等處理獲取上清液。被辣根過氧化物酶標記或固定在反應孔中的黃曲霉毒素Ｂ1，與試樣上清液或標準品中的黃曲霉毒素Ｂ1競爭性 結合特異性抗體。在洗滌后加入相應顯色劑顯色，經無機酸終止反應，于450ｎｍ 或630ｎｍ 波長下檢 測。樣品中的黃曲霉毒素Ｂ１與吸光度在一定濃度范圍內呈反比。
二、實驗準備
1、試劑和材料：配制溶液所需試劑均為分析純，水為GB／T6682規定二級水。 按照試劑盒說明書所述，配制所需溶液。 所用商品化的試劑盒需驗證合格后方可使用。
2、儀器和設備：
①fluidot自動移液工作站，FDT-M8-4-300
②微孔板酶標儀：帶450與630nm（可選）濾光片
③研磨機
④振蕩器  SPP-SK-500
⑤電子天平：感量0.01g
⑥離心機：轉數≥6000r/min
⑦快速定量濾紙：孔徑11μｍ
⑧篩網：１ｍｍ～２ｍｍ孔徑
⑨黃曲霉毒素Ｂ１試劑盒及所要求其它儀器
 
三、實驗步驟 （在 20-24℃條件下操作）
1、稱取至少１００ｇ樣品，固體樣品用研磨機進行粉碎，粉碎后的樣品過１ｍｍ～２ｍｍ孔徑試驗篩。取５.０ｇ樣品于５０ｍＬ離心管中；液體樣品取１００ｇ待測樣品搖勻，稱取５.０ｇ樣品于５０ｍＬ離心管中，加入試劑盒所要求提取液。
2、將處理好的樣品與試劑盒中的96微孔板、標準品、酶標記物試劑、抗體溶液、顯色劑、終止液放置fluidot自動移液工作站的托盤與適配器中。
3、儀器自動取1個吸頭吸取標準或處理好的樣品加50ul到各自的微孔中，每個標準和樣品必須使用新的吸頭。
 
4、儀器自動取8個吸頭吸取稀釋了的酶標記物加50ul到微孔板底部，丟棄吸頭。
5、自動取8個吸頭吸取抗體溶液加50ul到每一個微孔底部，小心地使酶標板在平面上做圓周運動以充分混合。在室溫下（20℃-25 ℃）孵育30分鐘，丟棄吸頭。
 
6、倒出孔中的液體，將微孔架倒置在吸水紙上拍打以保證完全除去孔中的液體。用洗瓶或多通道移液器將 250ul 洗滌緩沖液加入孔中。再次倒出孔中的液體，完全除去孔中的液體，再重復操作洗滌步驟兩次以上。
7、自動取8個吸頭取基質/顯色劑加100ul到微孔中，充分混合并在室溫（20℃-25℃）暗處孵育 15 分鐘，丟棄吸頭。
8、自動取8個吸頭取反應終止液加入100ul 到微孔中充分混合。混合好在450nm處測量吸光度值，以空氣為空白，必須在加入停止液后15分鐘內讀取光度值。
 
 
四、結果
1、酶聯免疫試劑盒定量檢測的標準工作曲線繪制
所獲得的標準和樣品吸光度值的平均值除以第一個標準（0標準）的吸光度值再乘以100。因此0標準等于100%并且以百分比給出吸光度值。
 
計算的標準值繪成為一個以黃曲霉毒素 B1 濃度（ng/kg）的 半對數坐標系統曲線圖，相對應每一個樣品的濃度（ng/kg）可以從標準曲線上讀出。
 
請注意 ：為了獲得樣品中的黃曲霉毒素 B1 的實際濃度（ng/kg），從標準曲線上讀出的濃度值。
 
2、待測液濃度計算
按照試劑盒說明書提供的計算方法以及計算機軟件，將待測液吸光度代入曲線圖所獲得公式，計算得待測液濃度（ρ）。
3、結果計算
食品中黃曲霉毒素Ｂ１的含量計算：
 
計算結果保留小數點后兩位。
陽性樣品需用第一法、第二法或第三法進一步確認。
4、精密度
每個試樣稱取兩份進行平行測定，以其算術平均值為分析結果。 其分析結果的相對相差應不大于20％。
5、其他
當稱取谷物、堅果、油脂、調味品等樣品5g時，方法檢出限為１μｇ／kg定量限為３μｇ／kg。 當稱取特殊膳食用食品樣品5g時，方法檢出限為0.1μｇ／kg，定量限為0.3μｇ／kg。