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加味通竅活血湯對基底動脈增寬小鼠的影響

瀏覽次數:867 發布日期:2024-7-5  來源:本站 僅供參考,謝絕轉載,否則責任自負
客戶論文發表 | 加味通竅活血湯通過基因相關蛋白轉錄共激活因子與PDZ結合基序通路
對基底動脈增寬小鼠的影響

文獻信息
河南中醫藥大學第一附屬醫院腦病四區張道培教授團隊的研究成果《Effect of Jiawei Tongqiao Huoxue decoction in basilar artery dolichoectasia mice through yes-associated protein/transcriptional co-activator with PDZ-binding motif pathway》(加味通竅活血湯下調YAP/TAZ信號通路抗基底動脈延長擴張癥的作用及機制研究)在雜志《Journal of Ethnopharmacology》上發表。平生公司的桌面離體CT(VENUS)在論文中提供了重要的小鼠腦部血管三維圖像。

 該研究的通訊作者為張道培教授。


文獻背景
研究背景: 加味通竅活血湯是在清代王清任《醫林改錯》中通竅活血湯的基礎上化裁而來,由石菖蒲15g,赤芍12g,川芎12g,桃仁15g,紅棗15g,紅花12g,葛根12g,生姜12g,全蝎9g,麝香0.15g等藥物組成,具有活血化瘀通絡的作用。多項臨床試驗研究顯示,加味通竅活血湯不但能改善患者椎、基底動脈的血流速度,而且還能改善血流量和管壁剪切力的血流參數,但其分子機制尚未闡明。

研究目的:本研究旨在建立BAD小鼠模型,探討JTHD(加味通竅活血湯)的作用機制。

材料與方法:造模后C57/BL6雌性小鼠60只,隨機分為假手術組、模型組、阿托伐他汀鈣片組、JTHD低劑量組、JTHD高劑量組。經過14天的建模,藥物干預療程2個月。采用液相色譜-串聯質譜法(LC-MS)對JTHD進行分析。ELISA法檢測血管內皮細胞生長的變化血清中VEGF和脂蛋白a的含量。采用EVG染色觀察病理變化血管。TUNEL法檢測大鼠血管平滑肌細胞凋亡率(VSMCs)。采用Micro-CT和ImagePro Plus軟件觀察和計算彎曲指數;小鼠基底動脈血管的延長指數、血管直徑增加百分比和彎曲度。

實驗方法
動物模型建立、分組及給藥
造模參考了Day等人的方法,即通過小鼠小腦延髓池,用微量注射器緩慢刺入枕骨大孔,注射2.5μL含有25mu的彈性蛋白酶。14天內,因造模導致的死亡有5只小鼠。14天后,隨機取5只造模小鼠,通過FlowTech MICROFIL血管造影劑進行造影,然后用解剖顯微鏡匹配的MicroPublisher 5.0 RTV的照相機拍攝血管網圖像,并用校正的Q-Capture Pro 7軟件進行捕獲圖像,視覺評估基底動脈彎曲、擴張情況,當小鼠基底動脈出現彎曲、延長、擴張時,表示造模成功。假手術組僅在小腦延髓池內注射含有滅活后的彈性蛋白酶的磷酸鹽緩沖液2.5μL。

 造模后小鼠分為模型組、阿托伐他汀鈣片組、加味通竅活血湯低劑量組、加味通竅活血湯高劑量組(n=10)。其中,阿托伐他汀鈣片組給予2.6mg·Kg·d-1阿托伐他汀鈣片灌胃,加味通竅活血湯低、高劑量組分別給予含有3.4g生藥材·Kg·d-1和17g生藥材·Kg·d-1的加味通竅活血湯顆粒劑,假手術組和模型組給予等體積的純水。小鼠給加味通竅活血湯的劑量是基于臨床上60kg體重的人每天服原藥材計算。
 小鼠離體基底動脈形態的微CT斷層掃描

采用FlowTech MICROFIL血管造影劑進行造影,固定24h后,剝離腦組織。應用VENUS(平生醫療科技有限公司,型號:VNC-102)對小鼠離體腦組織進行了測量和分析。參數為:分辨率14μm,電壓和電流分別是90kV和0.06mA。CT掃描后,用Avatar軟件重建小鼠離體腦組織的圖像。然后使用分割功能,定義CT值大于500的范圍為血管區域,CT值大于-200以上范圍為整個小鼠腦組織區域。對指定的血管區域進行裁剪,擦除和該血管相連的其他血管區域,保留指定血管區域。

實驗結果
對基底動脈血管顯微結構的影響
與假手術組相比,模型組小鼠的基底動脈明顯迂曲、延長和擴張,(圖6,7),而假手術組未見明顯的變化(P<0.01)。與模型組相比,加味通竅活血湯干預2個月后,能夠顯著抑制顱內基底動脈的迂曲、延長和擴張(圖6,7)(P<0.05,P<0.01)。

圖6 小鼠顱內動脈血管的代表性三維圖像(n=4)

注:A空白組;B模型組;C阿托伐他汀鈣片組;D加味通竅活血湯低劑量組;E加味通竅活血湯高劑量組;↑ 所指的為基底動脈血管,其中(A)假手術組基底動脈血管平直,無彎曲和擴張;(B)模型組基底動脈血管出現明顯的擴張、延長和迂曲;(C)阿托伐他汀鈣片組基底動脈血管擴張、延長和迂曲的程度明顯減輕;(D)加味通竅活血湯低劑量組基底動脈血管出現明顯的擴張、延長和迂曲的程度有所減輕;(E)加味通竅活血湯高劑量組基底動脈血管擴張、延長和迂曲的程度顯著減輕。

實驗結論
綜上所述,研究通過小腦延髓池注射彈性蛋白酶的方法,構建了BAD小鼠模型,并鑒定出加味通竅活血湯含有多種抗血管炎癥反應和血管重塑的有效化合物成分。然后觀察加味通竅活血湯的干預作用,發現其具有良好的抗基底動脈血管延長、迂曲、擴張作用,其機制可能與下調YAP/TAZ信號通路,抑制血管平滑肌細胞凋亡有關。

使用設備

Micro CT(型號:VENUS)(平生醫療科技)
影像軟件:Avatar(平生醫療科技)

發布者:平生醫療科技(昆山)有限公司
聯系電話:0512-55151000-6058
E-mail:info@pingseng.com

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