轉(zhuǎn)染5步驟:
第一步:獲取目標細胞
第二步:混合和結(jié)合
轉(zhuǎn)移至Lonza認證的電轉(zhuǎn)杯或電轉(zhuǎn)板條中
第三步:選擇Nucleofector程序,放入電轉(zhuǎn)耗材,按下開始按鈕
第四步:用培養(yǎng)基將電轉(zhuǎn)耗材的細胞轉(zhuǎn)移出來
第五步:轉(zhuǎn)移至培養(yǎng)M中。Nucleofectionmm電轉(zhuǎn)后3-8小時即可檢驗
提高核轉(zhuǎn)效率8個TIPS:
1.準備好加了新鮮培養(yǎng)基的多孔板,并在實驗前于37°C下預平衡
2.使用傳代次數(shù)少并具有推薦融合度或密度(對數(shù)生長)的細胞
3.限制胰蛋白酶暴露時間,仔細監(jiān)測細胞分離情況
4.根據(jù)優(yōu)化方案進行細胞計數(shù)并使用適量細胞數(shù);所用細胞過少可能導致細胞死亡率增加
5.采用高質(zhì)量DNA,使用內(nèi)毒素去除試劑盒進行純化;請通過測定A260:A280比值檢查各質(zhì)粒制備液的純度
6.室溫下以離心速度80-100×g和方案規(guī)定的時間進行離心
7.離心后加入Nucleofector™溶液,混勻溶液/細胞沉淀制備成單細胞懸液,避免對細胞沉淀進行額外操作或用移液器槍頭抽吸
8.Nucleofection™核轉(zhuǎn)后,用核轉(zhuǎn)試劑盒內(nèi)配的一次性移液管在電轉(zhuǎn)耗材中的細胞頂部加入約500μL預熱培養(yǎng)基