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傳統手工制膠與預制膠的區別

瀏覽次數:1914 發布日期:2022-7-25  來源:本站 僅供參考,謝絕轉載,否則責任自負

SDS電泳技術首先在1967年由Shapiro建立,1969年由Weber和Osborne進一步完善。SDS電泳技術是在變性條件下使用陰離子表面活性劑十二烷基硫酸鈉(SDS)。SDS通過包裹蛋白質來變性和展開蛋白質疏水部分。SDS以一定的比例結合蛋白質,形成的SDS-蛋白復合物是高度負電荷的,在電泳中此類復合物可依據其分子量大小分離它們。

 

聚丙烯酰胺和瓊脂糖是兩種常用于電泳的支持基質,支持基質為多孔介質,其行為類似于分子篩。分子的分離取決于凝膠的孔徑及使用的支持基質。瓊脂糖具有較大的孔徑和非常適合分離大分子,如核酸和蛋白質-蛋白質復合物。聚丙烯酰胺具有較小的孔徑和非常適合分離大多數蛋白質和較小的核酸。

電泳的緩沖系統是用連續或不連續的方法進行的。連續緩沖系統只使用一種凝膠緩沖液和運行緩沖液。不連續的緩沖器系統使用不同的凝膠緩沖液和運行緩沖液。這個系統也可以使用兩個不同孔徑和濃度的凝膠層以及不同的緩沖液組成(堆積膠,分離膠)。使用不連續緩沖系統的電泳可達到更高的分辨率。

含有單一濃度的聚丙烯酰胺凝膠稱為固定濃度凝膠,聚丙烯酰胺凝膠濃度呈梯度范圍的凝膠被稱為梯度凝膠。使用梯度凝膠的優點首先是它可以分離比固定濃度凝膠分離范圍更廣的蛋白質,其次是它在轉印方面有優勢,它可以將分子量更大的蛋白分離在相對濃度較低的梯段,從而增加轉印效率。

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最初的SDS聚丙烯凝膠是管狀的

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Bio-rad公司的Mini手工聚丙烯酰胺凝膠灌制系統

通常Mini型手工聚丙烯酰胺凝膠在約8 cm X 10 cm的兩塊有支持物固定的玻璃板中灌制,玻璃板一塊厚一塊薄,合并厚度約為4 mm,凝膠凝固后可以直接放置于電泳槽中運行。在灌制時通常使用6%-20%的固定濃度分離膠及4%的固定濃度濃縮膠。最常用的凝膠緩沖系統為Laemmli系統,其膠內緩沖體系為Tris-Cl體系,分離膠的PH值約為8.8,濃縮膠的PH值約為6.8,其電泳運行緩沖體系為Tris-glycine體系,PH值約為8.3,為典型的不連續緩沖體系。其作為蛋白分離的經典方法已使用多年,但是由于其局限性,它有如下不足。

首先其分離膠的PH值為8.8,堿性條件,致使其保質期不會超過1個月。長時間放置丙烯酰胺會緩慢水解,導致分離介質變質,分離效果下降。此類凝膠只能短時間放置,現配現用為最佳。

其次丙烯酰胺為神經毒性物質,雖然市場上通常以膠液形式出售,相較于粉狀固體其配制時接觸程度降低,但依然需要防護措施,特別是不慎滴于皮膚上時丙烯酰胺可經皮膚吸收,相對來說危險性較大。

再次手工灌制凝膠基本為固定濃度膠,如果要灌制梯度膠,需要使用梯度混合儀,不僅操作復雜,而且無法保證批次的一致性。

最后堿性條件對于一部分蛋白來說不能保證其穩定性,如需要保證樣品條件需要更換中性緩沖體系。

基于以上各點,另一種緩沖體系的預制聚丙烯酰胺凝膠作為商品化的產品在市場出現。

首先其膠內緩沖體系為Bis-Tris-Cl體系,PH值為6.5-7.0。中性的緩沖體系,不僅可以保證絕大部分蛋白樣品的正確展現而且可以大大延長聚丙烯酰胺凝膠的保存時間,此類凝膠的保質期通常在一年以上。相對于Laemmli系統此緩沖體系對蛋白的分辨能力更優秀。

其次作為預制凝膠不再需要手工灌制,避免接觸丙烯酰胺類毒性物質。

再次作為商品化的預制凝膠具有不同的濃度和梯度可供選擇,客戶可以根據蛋白樣品的情況自由選擇合適的濃度和梯度,并且由于批量生產工藝穩定,可以保證凝膠產品的一致性。

NoninBio代理的Future PAGE™品牌預制膠,正是基于Bis-Tris的緩沖體系。具有優秀的分辨率和穩定性,避免您接觸毒性物質,可以根據您的需要選擇適合您樣品的濃度梯度。更有獨特的緩沖體系,可以耐受蛋白樣品的雜質干擾。

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Future PAGE™預制膠產品

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在對待含雜質量較多的樣品,Future PAGE™展現出優秀的分離性能

發布者:上海諾寧生物科技有限公司
聯系電話:18616364863
E-mail:p1986l@163.com

標簽: 預制膠
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