問題1：培養液pH值變化太快

細胞結構：

可能原因及解決辦法

（1）CO2張力不對

按培養液中NaHCO3濃度增加或減少培養箱內CO2濃度，2.0g/L到3.7g/L濃度NaHCO3對應CO2濃度為5％到10％。

（2）培養瓶蓋擰得太緊

松開瓶蓋1/4圈。

（3）NaHCO3緩沖系統緩沖力不足

改用不依賴CO2培養液。加HEPES緩沖液至10到25mM終濃度。

（4）培養液中鹽濃度不正確

5637(人膀胱癌細胞)在CO2培養環境中改用基于Earle′s鹽配制的培養液，在大氣培養環境中培養改用Hanks鹽配制的培養液。

（5）細菌、酵母或真菌污染

丟棄培養物，或用抗生素除菌。

問題2：培養液出現沉淀，但pH值不變

可能原因及解決方法

（1）洗滌劑清洗后殘留有磷酸鹽，將培養基成分沉淀下來

用去離子水反復沖洗玻璃器皿，然后滅菌。

（2）冰凍保存培養液

將培養液加熱到37℃，搖動使其溶解如沉淀仍然存在，丟棄培養液。

問題3：培養液出現沉淀，同時pH發生變化

可能原因

細菌或真菌污染

建議解決方法

丟棄培養物，或用抗生素除菌。

1、首先，觀察細胞培養瓶是否完好，培養液是否有漏液、渾濁等現象。若有，請拍照，并及時與技術支持聯系（所拍照片將作為后續服務依據）。

2、用75%酒精擦拭細胞培養瓶表面，顯微鏡下觀察細胞狀態。因運輸問題，部分貼壁細胞會有少量從瓶壁脫落；先不要打開培養瓶蓋，將細胞置于細胞培養箱內靜置培養2-4小時，以便穩定細胞狀態。

3、仔細閱讀細胞說明書，了解細胞相關信息，如貼壁特性（貼壁/懸浮）、細胞形態、所用基礎培養基、血清比例、所需細胞因子、傳代比例、換液頻率等。

4、靜置完成后，取出細胞培養瓶，鏡檢、拍照，記錄細胞狀態（所拍照片將作為后續服務依據）；建議細胞傳代培養后，定期拍照、記錄細胞生長狀態。

5、貼壁細胞：若細胞生長密度超過80%，可正常傳代；若未超過80%，移除細胞培養瓶內培養基，預留5ml左右繼續培養，直至細胞密度達80%左右再進行傳代操作，瓶蓋可稍微擰松。

6、懸浮細胞：將細胞培養瓶內液體全部轉移至50ml無菌離心管內，1200rpm離心5min，離心后上清培養基可收集備用，管底細胞沉淀加入5ml培養基吹打、重懸。鏡檢時，若細胞密度超過80%，可將細胞懸液分至2個細胞培養瓶內培養，補加培養基至5ml；若細胞密度未超過80%，將細胞懸液移至原瓶繼續培養，直至細胞密度達80%左右時再進行傳代操作。

注意事項：

1、可將培養瓶內多余的培養基轉移至50ml無菌離心管中，備用；細胞首次傳代時，可以將該培養基按照一定比例和客戶自備的培養基混合使用，讓細胞逐漸適應培養條件。

2、確認細胞狀態良好后，應及時將部分細胞凍存，再進行后續的實驗，避免后期實驗失誤可能發生細胞污染或死亡而導致的細胞丟失，影響后續實驗。

3、建議客戶收到細胞后前3天，100X、200X、400X各拍3張細胞照片，記錄細胞狀態，便于后續和技術支持溝通交流。

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