摘要：
在分析方法考察過程中，化學家經常評估純化過程化合物在不同色譜柱下的化學特性，例如，對于手性化合物的純化，通常在高效液相色譜分析中篩選幾種類型的色譜柱，盡管不同類型的色譜柱，有著很大的化學差異性，盡管ACCQ Prep制備色譜系統上可以安裝、使用各種類型色譜柱，ACCQ Prep可以通過只需對一種類型的色譜柱單次校準計算出聚焦梯度，該校準不局限于單個色譜柱，通用校準也可以用于不同化學特性的色譜柱，只要分析型色譜柱有相同的尺寸和使用相同的梯度和流速，就允許快速和簡便的色譜方法篩選。

背景：
許多實驗室，例如那些進行手性物質純化的實驗室，使用多種類型的色譜柱和溶劑進行方法開發，一般從對保留時間和分離度的初步評估開始，然后，偵測運行可以用來創建ACCQ Prep聚焦梯度的高效液相色譜制備方法，色譜柱安裝后，ACCQ Prep制備型HPLC的PeakTrak®軟件具有內置校準、計算偵測方法，這種內置校準的工作適用于所有色譜柱，無論色譜柱的制造商。ACCQPrep外部HPLC校準同樣可以用于各種類型色譜柱，只要分析柱的尺寸相同，并且使用相同的梯度。

實驗和結果：
C18色譜柱運行與C8色譜柱校準
通用測試混合物(PN 60-5234-835)在RediSep® C8制備色譜柱(20x150mm,5µ,200Å,PN 69-2203-858)上運行，使用甲醇/水溶劑系統，得到第一個保留時間在6min的洗脫峰，如在Teledyne ISCO 網站Technical Note 52 (TN52)所述的《校準分析型HPLC系統》。

相匹配的C8 UHPLC色譜柱(2x50 mm, PN 69-2203- 853)在水/甲醇體系中運行(5min 5 - 100% B，在100%甲醇下等度保持2.5min)，峰洗脫時間為3.757min，對應于ACCQPrep上的峰洗脫時間為6min。

制備色譜運行：
C8分析柱更換為RediSep Prep UHPLC C18分析柱(2x50 mm, PN 69-2203-854)，測試混合物在水/甲醇梯度中運行，梯度與C8柱相同。正如預期的那樣，由于C18色譜柱填料100Å孔徑使得保留增加，化合物在梯度中較晚被洗脫。
 

使用C18分析運行的數據計算圖2中的制備型梯度，同時使用圖1中的C8色譜柱的校準。制備純化是采用RediSep Prep C18柱(20x150 mm, 5µ，100Å， PN 69-2203-810)。兩種情況下，化合物洗脫時間都接近預期的6分鐘洗脫時間。

同時在C8制備型高效液相色譜柱上運行測試混合物，并進行C8校準；利用圖1中的分析數據計算第2洗脫峰在4.451min時的梯度。
 

色譜圖看起來與C18柱幾乎相同，唯一的區別是由于兩色譜柱之間的保留差異聚焦梯度開始和結束的溶劑組成不同。

硅膠色譜柱運行與C18校準：
4.6 × 150 mmRediSep Prep C18柱在AgilentHPLC分析系統上進行校正，如TN52中所述，梯度6min內從5到100%甲醇，然后以1.0mL/min的流速100%甲醇保持6min。溶劑改為正己烷/乙酸乙酯，色譜柱改為4.6 × 150 mm RediSep Prep硅膠柱。同樣的梯度法用于新溶劑體系和色譜柱，梯度6min內5至100%乙酸乙酯，將methyl paraben樣品注入，在20x150mm的RediSep Prep硅膠柱上，在正己烷/乙酸乙酯中進行聚焦梯度的保留時間如圖4所示，樣品在計算梯度的中間附近被洗脫。
 

 
結論：
在PeakTrak聚焦梯度生成中，對于某類化學特性的色譜柱校準可用于另一類化學特性的色譜柱，這允許在選擇分析、制備系統色譜柱的更多靈活性，并確保適當的可擴展性。

遵循一個簡單的規則，在使用外部HPLC分析柱的長度和內徑尺寸相同情況下，然后運行具有相同的梯度和流量。這允許用戶使用分析型HPLC偵測運行不同的色譜柱和溶劑系統，以確定具有較高樣品承載能力的最佳凈化方法。

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ACCQ Prep HP150 高壓制備型HPLC色譜系統

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