目前許多基層醫院都購置了數字病理掃描儀（WSI掃描儀），但不是把病理切片放到WSI掃描儀上就自動地得到診斷質量的數字切片圖像，掃描前的固定、染色等制片許多步驟會極大地影響隨后的掃描質量，甚至導致掃描失敗，這與您使用什么品牌的掃描儀無關。你想從你的病理切片掃描出高質量的圖像，以下注意事項可以幫助您使用好WSI掃描儀  

1. 組織準備 高質量制備的組織至關重要的，最好的數碼掃描儀也無法彌補樣本質量差等不足。組織準備的多個步驟可能會影響最終的圖像掃描。

• 切片-WSI掃描儀的聚焦范圍比傳統顯微鏡小，標準組織厚度（3–5μm）將給出最佳結果。對于厚切片，可能需要進行多平面（z-stack）掃描。
• 染色-染色強度的控制至關重要，過深、過淺將使掃描儀更難自動識別組織，常常需要更多的人工操作。
• 貼片——與傳統顯微鏡一樣，數字WSI掃描儀在平的組織表面工作效果最好。盡最大努力避免組織折疊，才能對焦清晰。
• 蓋玻片-掃描切片，最好使用玻璃蓋玻片，塑料蓋玻片可能會隨著時間的推移而扭曲從而影響掃描儀的聚焦。與傳統顯微鏡一樣，確保蓋玻片下沒有氣泡，以防止掃描失焦。

 
2. 切片檢查和準備

• 為了提高掃描的成功率和圖像質量，請務必在掃描前檢查并清潔切片。
• 切片上的標簽、膠帶都有可能影響平整度妨礙掃描操作。用超細纖維擦鏡布小心地擦拭切片，可以有效地清除上下表面的灰塵、水漬或指紋。對于不易清除的污漬，用水或酒精溶液將其浸濕后再擦拭清潔。
• 檢查切片有無裂紋或缺口，尤其是切片的4個角處。任何松動的玻璃碎片都可能在掃描過程中脫落并損壞掃描機構。
• 等到切片完全干燥后再裝入掃描儀，以免殘留液體進入掃描儀內。
• 確保將切片平放在掃描儀機架或托盤中，并固定好。如果掃描過程中切片不平整，則很可能在掃描中出現大面積失焦區域。切片底部貼標簽可能導致切片放置不平整，請確保這些標簽僅粘貼到切片朝上那一面。。

 
3. 掃描切片
每家WSI掃描儀都有自己的工作流程和要求。然而，為了掃描出好的圖像，還是有一些共同的原則要遵循：

• 掃描儀應能自動識別所有組織、鑒別所有的非組織物體如標簽，手工標注痕跡。組織染色過深、過淺、過多灰塵、手工標注痕跡都會影響組織區域的準確檢測。有可能的話，在高分辨率掃描之前，用制片質量不佳切片的測試組織檢測，以避免以后需要重新掃描。
• 聚焦應該是自動的，并且預對焦的焦點應該均勻地分布在整個組織上。如果一個區域掃描時失焦，請嘗試手動在這個區域設置對焦點。
• 避免將焦點設置到蓋玻片上或下面有碎屑、氣泡或其他缺陷的區域。這些可能會導致掃描儀聚焦在不正確的掃描平面上，導致掃描失焦。
• 對于高倍率的油鏡掃描，確保在掃描前加了足夠的油，以防止掃描過程中物鏡變干，從而在掃描圖像上留下“條紋”偽影。同時也要防止過多的油會滲到蓋玻片下，在掃描時留下“光滑”的外觀，導致細胞邊緣的對比度變差。有經驗的技術員正式油鏡掃描前的先進行一個快速的測試掃描會很有幫助。掃描結束后，一定要清理掉殘留油。

 
4. 質量控制（QC）
盡管做了很多努力，但也不能保證每次掃描結果都能接受。雖然每個實驗室的質量控制過程都會有所不同，也應該始終遵循您所在機構的質量控制要求，不過，通過圖像查看器用以下方法，可以讓您快速和高效的進行QC。

• 先在低倍率（如4倍）下檢查整個數字切片，檢查是否有可見的失焦區域或錯位。
• 在高倍率、高分辨率圖像條件下，在組織切片的最寬處以單個水平路徑進行查看，一個個視野基層，主要檢查是否有細微的失焦或細微的錯位。在垂直方向上，從組織的最寬處邊緣到另一側邊緣，以一條完整的直線進行檢查，每次一個視野，主要看是否有任何失焦的區域。在高倍鏡下抽檢切片的幾個區域，特別是組織厚度不同或載玻片有缺陷的區域，這些區域是最有可能失焦的區域。

遵循這些簡單的指導原則，就能幫助您生成更高質量的數字圖像，永久保存，隨時查看、共享和分析。