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IPKine™新型二抗解決方案在免疫共沉淀法后IP-WB實驗的驗證方法

瀏覽次數:2627 發布日期:2020-6-28  來源:本站 僅供參考,謝絕轉載,否則責任自負

免疫共沉淀(Co-Immunoprecipitation)是以抗體和抗原之間的專一性作用為基礎的用于研究蛋白質相互作用的經典方法。是確定兩種蛋白質在完整細胞內生理性相互作用的有效方法。
 
當細胞在非變性條件下被裂解時,完整細胞內存在的許多蛋白質-蛋白質間的相互作用被保留了下來。當用預先固化在argarose beads上的蛋白質A的抗體免疫沉淀A蛋白,那么與A蛋白在體內結合的蛋白質B也能一起沉淀下來。再通過蛋白變性分離,對B蛋白進行檢測,進而證明兩者間的相互作用。
這種方法得到的目的蛋白是在細胞內與興趣蛋白天然結合的,符合體內實際情況,得到的結果可信度高。這種方法常用于測定兩種目標蛋白質是否在體內結合;也可用于確定一種特定蛋白質的新的作用搭檔。

原理:
當細胞在非變性條件下被裂解時,完整細胞內存在的許多蛋白質-蛋白質間的相互作用被保留了下來。當用預先固化在Argarose Beads上的蛋白質A的抗體免疫沉淀A蛋白,那么與A蛋白在體內結合的蛋白質B也能一起沉淀下來。再通過蛋白變性分離,對B蛋白進行檢測,進而證明兩者間的相互作用。
這種方法得到的目的蛋白是在細胞內與興趣蛋白天然結合的,符合體內實際情況,得到的結果可信度高。這種方法常用于測定兩種目標蛋白質是否在體內結合;也可用于確定一種特定蛋白質的新的作用搭檔。
優點:
(1)相互作用的蛋白質都是經翻譯后修飾的,處于天然狀態;
(2)蛋白的相互作用是在自然狀態下進行的,可以避免人為的影響;
(3)可以分離得到天然狀態的相互作用蛋白復合物。
缺點:
(1)可能檢測不到低親和力和瞬間的蛋白質-蛋白質相互作用;
(2)兩種蛋白質的結合可能不是直接結合,而可能有第三者在中間起橋梁作用;
(3)必須在實驗前預測目的蛋白是什么,以選擇最后檢測的抗體,所以,若預測不正確,實驗就得不到結果,方法本身具有冒險性。
(4)靈敏度沒有親和色譜高。
常見問題:在免疫沉淀實驗后的WB驗證環節中,當使用常規的 Anti-IgG (H+L) 酶標二抗時,通常會出現對應免疫沉淀一抗的重鏈(50 kDa)和輕鏈(25 kDa)的兩條帶。如果檢測的目的蛋白分子量在50 kDa或者25 kDa附近時,就會受到這兩條帶的干擾。
Abbkine解決方案:產生此問題的重點在于實驗中目的蛋白的信號模糊,無法進行判斷,那就需要在根本上將干擾的信號降到最低,而IPKine系列二抗經過特別設計和優化,可以和重/輕鏈特異性結合從而明顯看到目的蛋白信號。如果目的條帶在55kDa左右,可以通過選擇與輕鏈特異性結合的二抗,來消除重鏈條帶對目的蛋白檢測的干擾。如下圖:

 
IPKine是一系列新型的二抗產品,能有效解決IP-WB后的輕/重鏈干擾問題。IPKine系列二抗經過特別優化,不會與IgG的輕/重鏈分子結合,只識別IgG分子的重/輕鏈部分,從而能有效解決IP實驗后的WB檢測中面臨的輕/重鏈干擾信號降到最低。
另外,IPKine系列二抗經過特別優化,其針對目的種屬的特異性非常高,同時針對其他非目的種屬的抗體分子的非特異性結合降到最低,從而有效避免了二抗與樣本內免疫球蛋白分子的非特異性雜交,提高實驗的特異性和信噪比。
Abbkine 相關產品信息:
產品名稱 特異性 貨號 規格
IPKine™ HRP Goat Anti-Mouse IgG LCS Light chain specific
(輕鏈特異性)
A25012 100/500 ul
IPKine™ HRP Mouse Anti-Rabbit IgG LCS A25022 100/500 ul
IPKine™ HRP Goat Anti-Mouse IgG HCS Heavy chain specific
(重鏈特異性)
A25112 100/500 ul
IPKine™ HRP Goat Anti-Rabbit IgG HCS A25222 100/500 ul
 
 
特點與優勢:
1,小包裝即用型試劑,極具性價比;
2,更干凈的背景,更清晰的條帶,卓越的信噪比;
3,完美避免抗體重鏈或者輕鏈的干擾問題;
4,使用簡便,無需額外的試劑和操作步驟;
5,經特殊優化,與其它種屬的IgG分子的交叉反應極低。
Abbkine專注于蛋白學和細胞學領域,致力于創新和研發各類抗體、蛋白質、分析試劑與試劑盒,以期成為生命科學研究發展、藥物研發等領域的關鍵推動者。我們為您提供蛋白和免疫研究用戶最喜愛的產品,從免疫學基礎產品,如蛋白提取定量,到免疫學實驗的內參標簽抗體、一抗及二抗等;細胞研究用戶最喜愛的產品,從用于檢測細胞狀態的染料及試劑盒,細胞器提取試劑盒,細胞亞結構染色示蹤及細胞代謝檢測產品,到用于細胞培養的細胞因子及蛋白類檢測試劑盒,只為助力您的研究事業!
 
 
發布者:艾美捷科技有限公司
聯系電話:400-6800-868 027-59626688
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