細胞形態(tài)異常，魚骨圖來幫忙（五）
細胞培養(yǎng)過程中
細胞輔助試劑是不可或缺的角色
那么它是怎么影響細胞形態(tài)的呢？
BI中國市場部帶您分析分析~
細胞輔助試劑可分為以下四部分：
接下來我們逐條分析！
（點擊圖片，可查看詳細魚骨圖鏈接）
胰酶
★☆★☆★☆
什么情況下是胰酶可能出現(xiàn)了問題呢？一旦發(fā)生消化時間逐漸拉長，或是細胞消化不下來，需注意胰酶是否已經(jīng)失活。由于胰酶為蛋白類產(chǎn)品，反復(fù)凍融容易影響其活性。
品質(zhì)不佳的胰酶也容易帶入支原體或動物源性污染源，BI所生產(chǎn)的胰酶經(jīng)過輻射照射處理，確保品質(zhì)及有效杜絕支原體的引入。
臨床培養(yǎng)可選用重組胰酶，以避免引入未知動物源病原體。
解決方案：
一般胰酶保存方式，建議15或50ml分裝后-20℃凍存，使用前必須37℃水浴或培養(yǎng)箱回溫，胰酶消化后使用不含鈣鎂的緩沖液清洗細胞，以稀釋殘余的胰酶。
若使用無血清培養(yǎng)基培養(yǎng)時（血清中含有胰酶抑制蛋白），使用胰酶消化后可使用胰酶抑制劑終止殘存胰酶反應(yīng)。
Biological Industries（BI）可提供：
（點擊產(chǎn)品貨號，可查看產(chǎn)品鏈接）
|
產(chǎn)品名稱 |
貨號 |
|
Trypsin Solution B（0.25%）, without Calcium and Magnesium, without Phenol Red |
03-046-1A/B |
|
Trypsin Solution B（0.25%）,10X Conc, without Calcium and Magnesium, without Phenol Red |
03-046-5B |
|
Crystalline Trypsin Solution（0.02%）, without Phenol Red |
03-047-1A/B |
|
Trypsin EDTA Solution A（0.25%）,EDTA（0.02%）, with Phenol Red |
03-050-1A/B |
|
Trypsin EDTA（0.5%）, EDTA（0.2%）,10X Conc, without Phenol Red |
03-051-5B |
|
Trypsin EDTA Solution B（0.25%）,EDTA（0.05%）, with Phenol Red |
03-052-1A/B |
|
Trypsin EDTA Solution C（0.05%）,EDTA（0.02%）, with Phenol Red |
03-053-1A/B |
|
Trypsin EDTA Solution C（0.05%）,EDTA（0.02%）, without Phenol Red |
03-054-1A/B |
|
Soybean Trypsin Inhibitor 50X Conc., 5mg/ml |
03-048-1C |
★☆★☆★☆
細胞在胰酶消化傳代之前，應(yīng)使用PBS洗滌殘留的完全培養(yǎng)基（完全培養(yǎng)基中的血清含有胰酶抑制蛋白），如果是對于一些更難消化的細胞，則必須使用不含Ca2+，Mg2+離子的PBS，因為這些離子也會抑制酶的活性。
解決方案：Biological Industries（BI）可提供：
（點擊產(chǎn)品貨號，可查看產(chǎn)品鏈接）
|
產(chǎn)品名稱 |
貨號 |
|
Hanks' Balanced Salt Solution，With Calcium and Magnesium With Phenol Red |
02-015-1ACS |
|
Dulbecco's Phosphate Buffered Saline (DPBS), without Calcium and Magnesium |
02-023-1ACS |
|
Dulbecco's Phosphate Buffered Saline (DPBS), 10X Conc., without Calcium and Magnesium |
02-023-5ACS |
|
Phosphate Buffered Saline (PBS), PH=7.4, without Calcium and Magnesium |
02-024-1ACS |
|
Phosphate Buffered Saline (PBS), PH=7.4, without Calcium and Magnesium，10X Conc. |
02-024-5ACS |
應(yīng)從正規(guī)供應(yīng)商處購買，以確保品質(zhì)，如滲透壓、無菌等。
★☆★☆★☆
凍存液中的抗凍劑對細胞多少具有毒性，所以細胞解凍復(fù)蘇時，不宜在冷凍管內(nèi)懸浮太久，需在解凍復(fù)蘇后盡快轉(zhuǎn)移到完全培養(yǎng)基中，并在隔天置換掉含有抗凍劑的培養(yǎng)基。
細胞的狀態(tài)不佳，可提高培養(yǎng)基內(nèi)血清的比率，隔天就更換培養(yǎng)基，以置換掉含有DMSO的培養(yǎng)基。也有可能有些細胞本身冷凍后存活率不佳或冷凍時的細胞數(shù)較少。
如以上都有注意到，但復(fù)蘇率仍然不佳，就必須考慮是否為凍存操作步驟出了問題，是否程序降溫、或凍存前細胞狀態(tài)已不佳（存活率低）。
（詳細凍存手法可戳此處）
解決方案：建議選取指數(shù)增長時期的細胞凍存，此時細胞狀態(tài)較佳。
Biological Industries（BI）可提供：
（點擊產(chǎn)品貨號，可查看產(chǎn)品鏈接）
|
中文名稱 |
貨號 |
|
無血清細胞凍存液 |
05-065-1 |
|
無血清間充質(zhì)干細胞凍存液 |
05-712-1 |
|
無血清干細胞凍存液 |
05-710-1 |
|
D10無血清凍存液 |
05-713-1 |
抗生素
★☆★☆★☆
細胞在體內(nèi)是無菌生長狀態(tài)，所以抗生素對細胞會有一定程度的影響。已知某些抗生素對細胞的不同影響，如：
1. β-內(nèi)酰胺類抗生素（青霉素）--會影響蛋白質(zhì)合成，抑制細胞生長增殖；
2. 氨基糖苷類/氨基糖類（鏈霉素，卡那霉素，慶大霉素）--會減少蛋白質(zhì)合成，ATP水平降低，產(chǎn)生細胞毒性；
3. 內(nèi)酯類（兩性霉素B/fungizone, 制霉菌素）--干擾細胞膜，產(chǎn)生細胞毒性；
所以一般常規(guī)細胞培養(yǎng)，請盡量降低抗生素使用率，避免上述影響及細菌抗藥性產(chǎn)生。
解決方案：
Biological Industries（BI）可提供：
（點擊產(chǎn)品貨號，可查看產(chǎn)品鏈接）
|
中文名稱 |
貨號 |
|
兩性霉素B 250mg/ml |
03-028-1B |
|
兩性霉素B 2500mg/ml |
03-029-1B |
|
制真霉素 |
03-030-1C |
|
青鏈雙抗 |
03-031-1B |
|
青鏈雙抗，10X濃縮 |
03-031-5B |
|
青鏈霉素+制真霉素 三抗 |
03-032-1B |
|
青鏈霉素+兩性霉素B 三抗 |
03-033-1B |
|
青鏈霉素+新霉素 三抗 |
03-034-1B |
|
硫酸慶大霉素溶液 |
03-035-1B |
|
卡那霉素溶液 |
03-049-1B |
使用抗生素的時機：
1. 原代細胞培養(yǎng)時---因為在從組織分離時易帶入污染；
2. 觀察到，并且確認是微生物污染時（去除微生物后，應(yīng)立即停用抗生素）；
3. 盡量避免使用抗生素作為預(yù)防的方法；
好啦，本期介紹就到此處啦
大家可以點擊下方鏈接回顧精彩內(nèi)容
希望能幫助到各位噢
感謝大家對以色列BI的關(guān)注
--BI中國市場部
關(guān)注微信公眾號
可留言或私信我們
BI中國市場部：上海逍鵬生物科技有限公司
產(chǎn)品咨詢：021-58785545-8006, 18917190011
技術(shù)支持：400-820-3979
了解詳細信息可戳原文
原文請點擊：閱讀詳情
