近日，華山醫院關明教授團隊在《Clinica Chimica Acta》雜志發表題為”Detection of BRAF V600E mutation in fine-needle aspiration fluid of papillary thyroid carcinoma by droplet digital PCR”的研究論文。在關明教授的指導下，中心實驗室的許笑助理研究員首次通過微滴式數字PCR（ddPCR）以甲狀腺乳頭狀癌（PTC）患者的細針穿刺（FNA）樣本為檢材，建立了精準可靠、靈敏度高的BRAF V600E突變檢測方法。

PTC是最常見的內分泌腫瘤，占甲狀腺癌的85%。目前，超聲引導下的FNA樣本病理檢查是診斷PTC的金標準。但是，高達1/3的病例通過常規病理學檢查進行確診時仍然面臨巨大的挑戰，主要歸結于FNA樣本中獲得的腫瘤細胞數量少且細胞質量及單一性方面差異較大。隨著科學技術的發展，通過分子生物學方法檢測核酸物質的遺傳學改變成功克服了臨床PTC診斷的難點。目前，常見的檢測方法主要有免疫組化、ARMS法和測序法，但是這些檢測技術受靈敏度的限制無法有效實現FNA樣本中少量腫瘤細胞的檢測，因此需要建立一種更為精準和靈敏的方法用于PTC的早期診斷。

微滴式數字PCR是一種新型的核酸定量技術，可以實現對初始模板的精準定量，與其它臨床檢測方法相比靈敏度更高、特異性更好。此外，在過去幾十年BRAF V600E突變已確定是最常見的與PTC的發生、發展及臨床病理特征密切相關的分子標志物。因此，該研究基于ddPCR首次對FNA樣本的BRAF V600E突變檢測，同時與常規ARMS方法進行比對，用于PTC臨床樣本的檢測。研究根據NCCN甲狀腺癌臨床實踐指南，收集并診斷了146例PTC患者、2例甲狀腺濾泡狀癌（FTC）和12例甲狀腺良性結節病例。采集FNA樣本，分別采用ddPCR和ARMS檢測其BRAFV600E突變。

研究結果顯示，ddPCR在檢測中具有良好的重復性（CV0.1%=22.82%，CV10%=4.85%）和極高的檢測靈敏度（最低1-2 copies/μL，0.01%）。在全部160例病例中，使用ddPCR共測得128例BRAF V600E突變，其中4例為ARMS陰性病例，3例為良性結節病例。由此可知，在FNA標本的BRAF V600E突變檢測中，ddPCR的敏感度和準確性表現優異。在一些臨床樣本的檢測應用中ddPCR優于金標準的病理檢測及傳統的ARMS方法，詳見圖1。綜上所述，基于ddPCR的檢測方法能有效提高檢出率、避免誤檢、漏檢，適用于PTC的早期臨床診斷。
 

A. H&E staining of 2 FNA samples revealed tumor cells in Sample 01 but not Sample 02.

B. ARMS detected BRAF V600E mutation in Sample02 but not Sample 01.

C. ddPCR detected BRAF V600E mutation in both samples.

圖1.臨床樣本的病理學、ARMS及ddPCR檢測結果

該論文的合作方為交通大學醫學院附屬仁濟醫院，并列第一作者為來自仁濟醫院的馬硝惟，并列通訊作者為仁濟醫院檢驗科李敏主任。本課題得到國家自然科學基金、上海市衛生局及上海市市科委等的經費資助。

論文鏈接：

https://doi.org/10.1016/j.cca.2019.01.017