阪崎克羅諾桿菌核酸檢測試劑盒（PCR-熒光探針法）的使用說明

瀏覽次數(shù)：4292　發(fā)布日期：2018-5-3　來源：本站　僅供參考，謝絕轉(zhuǎn)載，否則責(zé)任自負(fù)

阪崎腸桿菌核酸檢測試劑盒（一管式PCR-熒光探針法）

◆ 產(chǎn)品說明

阪崎腸桿菌核酸檢測試劑盒（PCR-熒光探針法）參照《SN/T 1870—2016 進(jìn)出口食品中食源性致病菌檢測方法實(shí)時(shí)熒光PCR法》進(jìn)行設(shè)計(jì)，可針對食品樣品中阪崎克羅諾桿菌（阪崎腸桿菌）的特異核酸片段進(jìn)行擴(kuò)增，通過實(shí)時(shí)擴(kuò)增曲線判定結(jié)果。該產(chǎn)品檢出限為10^3 cfu/ml（使用071021M細(xì)菌基因組DNA提取試劑盒提取1 ml 10^3cfu/ml增菌液的細(xì)菌基因組DNA作為模板）。

◆ 產(chǎn)品組成（ 96測試）

011122LⅡ
試劑	含量
A-ES-P	20μL × 8管×12排
NG-P	100μl×3支
PG-ES-P	100μl×2支

◆ 適用儀器

熒光PCR儀（如ABI 7500）等可配套0.1 mlPCR八聯(lián)管的PCR擴(kuò)增儀。

◆ 自備耗材和儀器

①滅菌1.5mL或2.0mL離心管；③冰盒；④移液器（1-10μL，10-100μL，100-1000μL）及配套滅菌吸頭；⑤離心機(jī)；⑥渦旋混勻器；⑦金屬浴；⑧均質(zhì)機(jī)、攪拌機(jī)或研缽等研磨器具；⑨電子天平。

◆ 注意事項(xiàng)

1．本試劑檢測靈敏度高。為了防止污染，實(shí)驗(yàn)要分區(qū)操作。

1）第一區(qū)：試劑準(zhǔn)備區(qū)。

2）第二區(qū)：樣本制備區(qū)。

3）第三區(qū)：擴(kuò)增及產(chǎn)物分析區(qū)。

★ 分區(qū)之間最好進(jìn)行物理性隔離，避免人為因素造成的污染。

2. 實(shí)驗(yàn)過程中穿戴工作服和乳膠手套，使用移液器，實(shí)驗(yàn)產(chǎn)生的所有廢棄物及時(shí)處理。

3．嚴(yán)格按照操作步驟操作，試劑配制和加樣等步驟請嚴(yán)格按照說明書要求在冰上操作。

4．反應(yīng)液中的成分對光敏感，應(yīng)避光保存。試劑使用前剪下所需的測試數(shù)，解凍后使用前離心30秒。

5．反應(yīng)結(jié)束后，擴(kuò)增管請置于密封袋內(nèi)丟棄，當(dāng)日清理，開蓋易造成氣溶膠污染，禁止開蓋。

6．不同批號試劑請勿混合使用，在有效期內(nèi)使用。

◆ 樣品處理

參照《GB 4789.40-2016 食品安全國家標(biāo)準(zhǔn) 食品微生物學(xué)檢驗(yàn) 克羅諾桿菌屬（阪崎腸桿菌）檢驗(yàn)》進(jìn)行阪崎克羅諾桿菌的樣品制備、增菌培養(yǎng)和分離。

◆ 實(shí)驗(yàn)操作

1. 模板制備（樣本制備區(qū)）

建議使用試劑配套細(xì)菌組DNA提取系列產(chǎn)品，具體過程詳見產(chǎn)品說明書。

2．添加模板（樣本制備區(qū)，放置于冰盒中進(jìn)行）

剪下所需測試數(shù)的已含有反應(yīng)液的PCR管，放置在室溫待解凍后，離心30秒后揭開封口膜，使用穿刺加樣法穿過固封層向每管反應(yīng)液中分別加入5μL模板，順序?yàn)镹G、待測樣品模板、PG-ES-P。蓋好配套的PCR管蓋后，渦旋混勻30s，離心1min，立即進(jìn)行PCR擴(kuò)增反應(yīng)。

3. 擴(kuò)增反應(yīng)（擴(kuò)增及產(chǎn)物分析區(qū)）

使用熒光定量PCR儀，熒光基團(tuán)選擇FAM，淬滅基團(tuán)選擇TAMRA。

按下列條件設(shè)置擴(kuò)增反應(yīng)：