文獻(xiàn)信息
北京大學(xué)腫瘤醫(yī)院暨北京市腫瘤防治研究所，核醫(yī)學(xué)科，國(guó)家藥監(jiān)局放射性藥物研究與評(píng)價(jià)重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，惡性腫瘤發(fā)病機(jī)制及轉(zhuǎn)化研究教育部重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室和貴州醫(yī)科大學(xué)醫(yī)學(xué)院等團(tuán)隊(duì)的研究成果Construction and preclinical evaluation of a ¹²⁴I-labelled bispecific antibody targeting PD-L1 and PD-L2（靶向PD-L1和PD-L2的¹²⁴I標(biāo)記雙特異性抗體的構(gòu)建和臨床前評(píng)價(jià)）在學(xué)術(shù)期刊《European Journal of Nuclear Medicine and Molecular Imaging》（IF=10.057）發(fā)表。平生公司的小動(dòng)物PET/CT（型號(hào)：Super Nova）產(chǎn)品在論文中提供了重要的腫瘤小鼠PET/CT圖像和定量分析。

 該研究的通訊作者為北腫李囡主任醫(yī)師、朱華研究員、楊志主任。第一作者為姚遠(yuǎn)同學(xué)。
 姚遠(yuǎn)，任亞楠，侯興國(guó)，王培，朱錦玉，劉松，馬曉琨，劉特立，楊志，朱華，李囡

文獻(xiàn)背景
實(shí)驗(yàn)?zāi)康模耗康腘B12是一種雙特異性抗體，由兩個(gè)抗程序性細(xì)胞死亡配體1（PD-L1）納米體和兩個(gè)反程序性細(xì)胞死亡率配體2（PD-L2）納米體組成。本研究的目的是設(shè)計(jì)一種靶向PD-L1/2的新型示蹤劑[¹²⁴I]I-NB12，并進(jìn)行臨床前評(píng)估，動(dòng)態(tài)監(jiān)測(cè)PD-L1/2表達(dá)，以確定癌癥患者對(duì)ICI治療的反應(yīng)性。

 實(shí)驗(yàn)方法：NB12在室溫下用放射性核素¹²⁴I標(biāo)記。進(jìn)行體外結(jié)合試驗(yàn)以評(píng)估[¹²⁴I]I-NB12對(duì)PD-L1和PD-L2的親和力。進(jìn)行了細(xì)胞攝取、藥代動(dòng)力學(xué)和生物分布實(shí)驗(yàn)，以評(píng)估其生物學(xué)特性。在不同時(shí)間點(diǎn)使用[¹²⁴I]I-NB12進(jìn)行微PET/CT成像。使用腫瘤組織進(jìn)行免疫組織化學(xué)和蘇木精和伊紅（HE）染色實(shí)驗(yàn)。常規(guī)血液、生化指標(biāo)和主要器官病理學(xué)用于評(píng)估示蹤劑的生物安全性。

實(shí)驗(yàn)結(jié)果：[¹²⁴I]I-NB12的放射化學(xué)產(chǎn)率為84.62±3.90%，放射化學(xué)純度（RCP）大于99%。[¹²⁴I]I-NB12對(duì)PD-L1（Kd=19.82nM）和PD-L2（Kd=2.93nM）具有高親和力。細(xì)胞攝取實(shí)驗(yàn)證實(shí)，A549-PDL1/2細(xì)胞對(duì)[¹²⁴I]I-NB12的攝取大于A549細(xì)胞。分布相和消除相的半衰期分別為0.26小時(shí)和4.08小時(shí)。與注射后24小時(shí)的A549荷瘤小鼠相比，Micro-PET/CT顯示A549-PDL1/2荷瘤小鼠的腫瘤區(qū)域有顯著的[¹²⁴I]I-NB12攝取。免疫組織化學(xué)和HE染色實(shí)驗(yàn)證實(shí)，成功構(gòu)建了荷瘤小鼠。

實(shí)驗(yàn)結(jié)論：作者構(gòu)建了一種靶向PD-L1和PD-L2的雙特異性抗體，即[¹²⁴I]I-NB12。生物學(xué)評(píng)估揭示了其對(duì)PD-L1/2的特異性和親和力，微PET/CT證實(shí)了在體內(nèi)觀察腫瘤PD-L1/2是可行的。使用[¹²⁴I]I-NB12可能是一種很有前途的策略，用于識(shí)別可能受益于ICI治療的癌癥患者。

實(shí)驗(yàn)方法
動(dòng)物模型
使用5周齡雌性昆明（KM）小鼠進(jìn)行藥代動(dòng)力學(xué)、生物分布和毒性試驗(yàn)。將A549、A549-PDL1和A549-PDL2細(xì)胞（1×10⁶/100µL）注射到5周齡雌性BALB/c裸鼠的腋窩中，以構(gòu)建皮下異種移植物小鼠模型。

 微PET成像研究

[¹²⁴I]將I-NB12（3.7 MBq/200µL）靜脈注射到攜帶腫瘤的小鼠體內(nèi)（n=3）。在異氟烷麻醉下，分別在3小時(shí)、24小時(shí)、48小時(shí)和72小時(shí)進(jìn)行Micro-PET/CT（Super Nova PET/CT，Pingseng Health，China）成像，方案涉及10分鐘的靜態(tài)PET掃描。Avatar 3（Pingseng Healthcare）基于CT數(shù)據(jù)通過(guò)衰減校正重建PET圖像。繪制感興趣區(qū)域（ROI）并用于量化示蹤劑攝取。結(jié)果顯示為最大標(biāo)準(zhǔn)攝取值（SUVmax）。在微PET成像前3天，給小鼠喂食0.5%的碘化鉀溶液，作為甲狀腺和胃的預(yù)阻斷劑。

圖5 腫瘤模型小鼠的微PET/CT成像和ROI分析。（A）腫瘤模型的微型PET/CT成像，虛線圓圈表示腫瘤病變。（B） [¹²⁴I]I-NB12在不同時(shí)間點(diǎn)在A549-PDL1小鼠器官中的SUVmax。（C） [¹²⁴I]I-NB12在不同時(shí)間點(diǎn)在A549-PDL2小鼠器官中的SUVmax。（D）不同時(shí)間點(diǎn)A549小鼠器官中[¹²⁴I]I-NB12的SUVmax。（E）每組不同時(shí)間點(diǎn)的腫瘤SUVmax。

文獻(xiàn)結(jié)論
在作者的研究中，作者評(píng)估并表征了[⁸⁹Zr]Zr標(biāo)記的Ab253（一種靶向人CD146的特異性抗體）作為CD146特異性黑色素瘤顯像劑的能力，該顯像劑能夠描繪不同的CD146表達(dá)。對(duì)攜帶黑色素瘤的小鼠進(jìn)行長(zhǎng)達(dá)10天的PET成像，觀察到腫瘤對(duì)放射性示蹤劑的強(qiáng)烈攝取，這與CD146表達(dá)水平密切相關(guān)。體外和離體研究證實(shí)了這一點(diǎn)。在這里，作者展示了在黑色素瘤模型中使用Ab253作為體內(nèi)靶向劑進(jìn)行PET無(wú)創(chuàng)成像的能力。由于CD146在各種腫瘤中的過(guò)表達(dá)，特別是黑色素瘤，作者預(yù)計(jì)這種放射性標(biāo)記的抗體將在黑色素瘤診斷、患者分層和治療反應(yīng)監(jiān)測(cè)中發(fā)揮重要作用。

使用設(shè)備

  Super Nova^® Micro PET/CT（III 代外觀圖）