同型對照抗體的選擇和使用方法及PBS替代的可行性
什么是同型對照抗體？一定要用嗎？用 PBS 替代是否可行？同型對照抗體該怎么選？
Tips：
01
什么是同型對照抗體？
同型對照抗體 (Isotype control antibody) 通常用于在體外和體內準確檢測抗體藥物作用和功效，評估非特異性結合或背景信號。它們與研究抗體 (實驗抗體) 有相同的類別和亞類，但是它們與目標靶點無特異性結合。
02
為何使用同型對照抗體？
在進行體內藥效評價和體外免疫檢測實驗時，同型對照抗體的作用至關重要：
03
PBS 是否可作同型對照抗體的“平替”？
同型對照抗體作為體內療效的重要工具，為準確評價抗體藥物效應提供適當的陰性對照。與同型對照進行比較，可以避免對抗體功效產生高估或低估，對于下游結果的免疫分析和數據分析非常重要。
PBS 作為對照（如 PBS）可能會導致數據的假陽性。而高質量的同型對照抗體可以準確區分精準藥物開發分析的特異性與背景。
04
同型對照抗體選擇原則？
1. 種屬來源相同 – Mouse, Rat, Human；
2. 亞型相同 – IgG1, IgG2a, IgG2b, IgG3；
3. 亞鏈相同 – kappa, lambda;
4. 濃度劑量相同 – 對照抗體的使用濃度或劑量應與實驗抗體相同或相似；
5. 抗體質量 – 選擇高純度、低內毒素的同型對照抗體。
IgG 亞類在小鼠模型和人類中差異最大。人 IgG 同種型由四個亞類 (IgG1、IgG2、IgG3 和 IgG4) 組成，每個亞類包含不同的重鏈。在小鼠中，IgG 亞型分為五個亞類 (IgG1、IgG2a、IgG2b、IgG2c 和 IgG3)。在大鼠中，有四個亞類 (IgG1、 IgG2a、IgG2b、IgG2c)。
詢價與訂購：
MCE 為廣大客戶提供高質量，高純度的同型對照抗體，經 SDS-PAGE，SEC-HPLC 驗證純度大于 95%，內毒素小于 1 EU/mg，可用于體內研究。
參考文獻：
[1] Schmid AS, et al. Advances in antibody engineering for rheumatic diseases. Nat Rev Rheumatol. 2019 Apr;15(4):197-207.
[2] Hammerbeck, C. et al. Primary and Secondary Antibodies and Flow Cytometry Controls. In: Flow Cytometry Basics for the Non-Expert. Techniques in Life Science and Biomedicine for the Non-Expert. Springer, Cham. 2018.
Tips：
- 對照抗體包括陽性對照抗體和陰性對照抗體。
- 陰性對照抗體一般為同型對照抗體。
- 陽性對照抗體一般為已進入臨床研究或者臨床已經獲批被證明有效的抗體。
01
什么是同型對照抗體？
同型對照抗體 (Isotype control antibody) 通常用于在體外和體內準確檢測抗體藥物作用和功效，評估非特異性結合或背景信號。它們與研究抗體 (實驗抗體) 有相同的類別和亞類，但是它們與目標靶點無特異性結合。
圖 1. 用作陰性對照的同型對照抗體。
- MCE 同型對照抗體專門為動物體內實驗研究定制，已經在體內藥效研究中成功通過驗證。
- MCE 同型對照抗體是以 Hen egg lysozyme / HA protein of H7N9 / trinitrophenol 為抗原在 CHO 細胞中表達的重組抗體。抗原蛋白在人與小鼠中均不存在，從而避免了發生交叉反應。
- MCE 同型對照抗體在低內毒素條件下生產，并通過了嚴格的質量控制。每個同型對照抗體都能適用于多方面的應用，如作為體內陰性對照，流式抗體等。
02
為何使用同型對照抗體？
在進行體內藥效評價和體外免疫檢測實驗時，同型對照抗體的作用至關重要：
- 評估非特異性結合：由于抗體與靶細胞上的 Fc 受體結合，如 B 細胞、樹突狀細胞、NK 細胞及巨噬細胞等，可能導致假陽性[1]。因此，同型對照抗體可以幫助排除由待測抗體的 Fc 與 FcR 結合導致對療效分析可能產生的影響；
- 優化實驗條件：不清楚表達情況的時候，特別是確定某種抗原是否在細胞表達以及相應表達含量時，一定要用同型對照來界定陰性；
- 確保結果的準確性：它們是實驗結果可靠性的保證。
圖 2. 抗體 Fc 介導的效應器功能[1]。
03
PBS 是否可作同型對照抗體的“平替”？
同型對照抗體作為體內療效的重要工具，為準確評價抗體藥物效應提供適當的陰性對照。與同型對照進行比較，可以避免對抗體功效產生高估或低估，對于下游結果的免疫分析和數據分析非常重要。
PBS 作為對照（如 PBS）可能會導致數據的假陽性。而高質量的同型對照抗體可以準確區分精準藥物開發分析的特異性與背景。
04
同型對照抗體選擇原則？
1. 種屬來源相同 – Mouse, Rat, Human；
2. 亞型相同 – IgG1, IgG2a, IgG2b, IgG3；
3. 亞鏈相同 – kappa, lambda;
4. 濃度劑量相同 – 對照抗體的使用濃度或劑量應與實驗抗體相同或相似；
5. 抗體質量 – 選擇高純度、低內毒素的同型對照抗體。
IgG 亞類在小鼠模型和人類中差異最大。人 IgG 同種型由四個亞類 (IgG1、IgG2、IgG3 和 IgG4) 組成，每個亞類包含不同的重鏈。在小鼠中，IgG 亞型分為五個亞類 (IgG1、IgG2a、IgG2b、IgG2c 和 IgG3)。在大鼠中，有四個亞類 (IgG1、 IgG2a、IgG2b、IgG2c)。
圖 3. 流式細胞術以 Mouse IgG2a 作為陰性對照[2]。
使用抗原特異性抗體與同型對照抗 (a)，而用 KLH 蛋白免疫小鼠產生的同型對照抗體不結合 (b)。用抗原特異性鼠抗人 CD4 抗體對人 PBMC 染色時，可檢測到陽性熒光信號，而用相應的鼠 IgG2a 同型對照抗體則檢測不到陽性信號。詢價與訂購：
MCE 為廣大客戶提供高質量，高純度的同型對照抗體，經 SDS-PAGE，SEC-HPLC 驗證純度大于 95%，內毒素小于 1 EU/mg，可用于體內研究。
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參考文獻：
[1] Schmid AS, et al. Advances in antibody engineering for rheumatic diseases. Nat Rev Rheumatol. 2019 Apr;15(4):197-207.
[2] Hammerbeck, C. et al. Primary and Secondary Antibodies and Flow Cytometry Controls. In: Flow Cytometry Basics for the Non-Expert. Techniques in Life Science and Biomedicine for the Non-Expert. Springer, Cham. 2018.
標簽：
#抗體#同型對照抗體#PBS
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