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研究進展:生物組織大深度定量光學成像的發展與應用

瀏覽次數:435 發布日期:2024-11-7  來源:本站 僅供參考,謝絕轉載,否則責任自負

生物組織大深度定量光學成像是指利用先進的光學成像方法拓展生物組織的成像深度,并進一步對獲取的光學圖像實施定量表征,是深入理解生物組織的結構功能特性和相關病理機制的重要手段。

近年來,面向生物組織大深度光學成像的方法不斷發展,其中包括光學相干層析、多光子成像和自適應光學等。

浙江大學光電科學與工程學院現代光學儀器國家重點實驗室的文志博團隊發表文章,介紹了浙江大學光電科學與工程學院近年來在生物組織大深度定量光學成像方面的一系列重要進展。包括光學相干層析結構與功能成像、基于三光子熒光顯微的大深度腦血管成像和新型的畸變誤差波前校正方法等,并進一步概述了如何對上述方法獲取的光學圖像實施定量表征以獲取生物組織的生理與病理信息。

生物組織大深度成像方法
光學相干層析(OCT)
OCT基于低相干干涉原理工作。光源發出的光經邁克耳孫干涉儀分成參考光和信號光,兩束光反射后干涉,干涉光譜經傅里葉變換得到結構圖像。在三維成像方面,通過軸向掃描獲取深度分辨信息,橫向掃描獲二維截面信息,再結合其他掃描模式實現三維成像。

傅里葉域OCT軸向量程受光譜采樣率限制,一般為1-5mm,不過研究人員不斷創新。例如Wang等采用虛像相控陣列(VIPA)細分光譜,實現了81.87mm的成像量程。在探頭小型化上也有諸多嘗試,美國約翰霍普金斯大學用單模光纖(SMF)成像但有局限,韓國國立釜山大學引入大纖芯光纖(LCF)有改進空間,而浙江大學Ding等提出的基于拉錐光纖的探頭性能更優,在1300nm波長下,實現了140μm工作距離、11.5μm橫向分辨率和520μm焦深。

OCT可在體獲取生物體內組織和器官的三維結構或功能信息,在眼科、皮膚科、神經科學、腦成像和腫瘤學等疾病診斷和監測中廣泛應用。

OCTA作為OCT的功能拓展,以紅細胞為標記實現毛細血管三維血流灌注可視化,已應用于多個領域。同時,眾多技術手段不斷涌現,如Cheng等建立血流信號統計模型,Guo等提出運動檢測方法,Huang等構建信噪比自適應方法,Li等提出改進分類器等。

在血流動力學監測方面,Chen等提出自適應時空核,Deng等實現視網膜神經血管耦合功能成像并加速數據處理,Zhang等實現神經調節微循環動態成像。此外,OCTA還有望用于血糖無創監測,如Liu等發展的相關技術發現了血液成分衰減系數與血糖濃度的關聯。將OCT樣品臂小型化與臨床內鏡通道結合,可用于內部器官早期腫瘤檢測,如Yao等利用不同探頭在口腔頰黏膜和膽胰管狹窄腔實現血流成像。

三光子熒光成像
三光子熒光成像具有長波長近紅外光激發和高階非線性光學效應兩大特點。近紅外光激發波長越長抗散射能力越強,常用 1300nm和1700nm附近窗口,穿透深度理論可達3mm以上。高階非線性效應使熒光信號局限在焦點處,保證了良好的信號背景比和高空間分辨率,成像深度和分辨率分別可達毫米量級和亞微米量級。

2013年美國康奈爾大學首次實現活體小鼠腦神經和腦血管的三光子熒光成像,之后在生物組織大深度成像中廣泛應用,包括腦結構和功能成像、熒光壽命成像和光動力治療等,還涉及小鼠脂肪肝診斷和淋巴系統追蹤等領域。例如深圳大學團隊在星形膠質細胞和小膠質細胞成像上取得成果,以及其他研究人員在不同方面的應用探索。

成像技術一直追求更大深度和更快速度。在增大深度方面,與AO技術結合可矯正像差提高成像質量,如歐洲分子生物學實驗室的研究。利用活體組織光透明技術可降低顱骨散射,不同研究人員通過多種方式提升了成像深度。在提高速度方面,美國康奈爾大學通過引入自適應激發光源提升了成像速度,但存在局限,還可通過優化熒光探針亮度進一步提升速度。

自適應光學(AO)
AO用于校正波前,解決生物樣本導致的成像問題。包括直接波前探測和間接波前探測兩種方案,直接波前探測常用Shack-Hartmann(SH)傳感器等,間接波前探測通過觀測圖像質量指標調整校準器件。AO系統由波前探測模塊、波前校正模塊和控制模塊組成,波前探測模塊精度至關重要。

自適應光學(AO)于1953年提出,20世紀70年代末在天文和軍用領域發展,21世紀轉向民用與顯微成像系統結合用于生物醫學研究。多年來經過不斷發展,如美國密歇根大學將其與雙光子成像技術結合,美國哈佛大學提出模式法,美國霍華德・休斯醫學研究所提出瞳孔分割法等。近年來,深度學習也應用于像差探測和校正,浙江大學Hu提出新型波前校正方法,還有其他研究人員提出多種基于深度學習的改進方法。

纖維狀結構空間取向定量表征
空間取向是纖維狀結構重要特征,二維取向計算常用傅里葉變換但有局限。近年來三維空間取向計算受關注,如2012年美國伊利諾伊大學香檳分校的研究有改進空間,2015年Liu等提出權重矢量求和法,計算速度更快,可得到像素的二維或三維空間取向。

基于空間取向,Liu等提出方向方差指標。通過小鼠乳腺癌模型和人體腹膜癌擴散模型研究發現,膠原纖維在正常和腫瘤組織中空間取向不同,腫瘤組織中排列更有序,三維方向方差更小,對癌癥研究有重要意義。

纖維狀結構空間曲率定量表征
Qian等提出像素級的纖維狀結構空間曲率定量表征方法。通過圖像二值化、計算空間取向、創建計算窗口等步驟得到曲率矩陣,提供像素級曲率信息,還可擴展到三維空間。

結合空間取向、方向方差和空間曲率三個指標,對小鼠全身血管進行多參數分析,空間曲率在鼠腦血管和胰腺癌診斷等方面是高靈敏指標。通過對細胞器和細胞骨架研究,發現空間曲率能反映內質網重塑特征,還發現新的內質網生長機制。

纖維狀結構直徑定量表征
Meng等提出二維和三維直徑定量表征方法。通過二值化處理、計算距離、執行算法和平滑處理等步驟,最后用偽彩色編碼得到血管直徑圖,該方法準確性高。

通過誘導小鼠光血栓形成,利用該方法研究腦血管血栓對鄰近血管的影響,可獲得血栓前后血管直徑信息,有助于研究血栓形成和變化。

結論與展望
先進的光學成像手段輔以特定的光學材料、波前探測元器件和深度學習等算法使得生物組織的成像深度不斷拓展,進一步延展了人們對生命活動的觀測能力。與此同時,對這些光學圖像進行高精度、高靈敏的定量表征,能夠精準揭示生物組織在生理病理過程中所發生的微小改變,進而提高人們對疾病的認知水平,并為多種重要疾病的診療提供新的視角和方法。

聲明:本文僅用作學術目的。文章來源于:文志博, 劉開元, 蔣慎益, 何木斌, 韓濤, 斯科, 李鵬, 劉智毅, 錢駿, 丁志華. 生物組織大深度定量光學成像[J]. 光學學報, 2022, 42(17): 1717001. Zhibo Wen, Kaiyuan Liu, Shenyi Jiang, Mubin He, Tao Han, Ke Si, Peng Li, Zhiyi Liu, Jun Qian, Zhihua Ding. Large-Depth Quantitative Optical Imaging of Biological Tissues[J]. Acta Optica Sinica, 2022, 42(17): 1717001.

發布者:羅輯技術(武漢)有限公司
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