方案摘要：金黃色葡萄球菌 Staphylococcus aureus，為革蘭氏陽(yáng)性球菌，呈葡萄狀排列，無(wú)芽胞，無(wú)莢膜，能分解甘露醇，血漿凝固酶陽(yáng)性。是革蘭氏陽(yáng)性菌代表，為一種常見(jiàn)的食源性致病微生物。本方法利用Baird Parker平板培養(yǎng)的方法達(dá)到快速檢測(cè)牙膏中金黃色葡萄球菌的含量。
方案詳情：
一、實(shí)驗(yàn)準(zhǔn)備
1、儀器和設(shè)備
① 顯微鏡。
② 恒溫培養(yǎng)箱：36℃±1℃。
③ 離心機(jī)。
④恒溫水浴箱。
⑤ 試管：18 mm×150 mm。
⑥ 載玻片。
⑦ 酒精燈。
⑧ 三角瓶：250 mL。
⑨ 高壓滅菌器。
⑩ 手動(dòng)移液器：fluidot  1 mL  MSP1K
⑪手動(dòng)移液器：fluidot   10 mL  MSP10K
⑫ 無(wú)菌吸管：1 mL（具0.01 mL刻度）FDT-SP01001
⑬無(wú)菌吸管：10 mL（具0.1 mL刻度）FDT-SP01010
⑭手動(dòng)移液器：fluidot  1 mL  MSP1K與 10 mL  MSP10K
⑮電動(dòng)大容量助吸器：fluidot  0.1-100 mL
⑯吸頭：1.5mL   FDT-1500-1-TSF
⑰滅菌平皿：fluidot  FDT-9CM-2-S，直徑90 mm。
⑱蠕動(dòng)泵分液器：fluidot  600D
 
2、培養(yǎng)基和試劑
① SCDLP 液體培養(yǎng)基
② 營(yíng)養(yǎng)肉湯
③ 7.5%氯化鈉肉湯
④ Baird Parker平板
⑤ 血瓊脂平板
⑥ 甘露醇發(fā)酵培養(yǎng)基    
⑦ 滅菌液體石蠟
⑧ 兔（人）血漿制備
二、 實(shí)驗(yàn)步驟
 
1、增菌：取1:10的檢液10 mL接種到90 mL SCDLP液體培養(yǎng)基中，事先需fluidot  600D蠕動(dòng)泵分液器分裝90 mL SCDLP液體培養(yǎng)基置至三角燒瓶，36℃±1℃培養(yǎng)箱，培養(yǎng)24 h±2 h。
2、分離：自上述增菌培養(yǎng)液中，取1~2接種環(huán)，劃線(xiàn)接種到Baird Parker平板上，如無(wú)此培養(yǎng)基也可劃線(xiàn)接種到血瓊脂平板上，置36℃±1℃培養(yǎng)48 h±2 h。在血瓊脂平板上菌落呈金黃色，圓形，不透明，表面光滑，周?chē)�有溶血圈。在Baird Parker平板培養(yǎng)基上為圓形，光滑，凸起，濕潤(rùn)，顏色呈灰色到黑色，邊緣為淡色，周?chē)鸀橐换鞚釒�，在其外層有一透明帶。用接種針接觸菌落似有奶油樹(shù)膠的軟度。偶然會(huì)遇到非脂肪溶解的類(lèi)似菌落，但無(wú)混濁帶及透明帶。挑取單個(gè)菌落分純?cè)谘�瓊脂平板上，�?6℃±1℃培養(yǎng)24 h±2 h。
3、染色鏡檢：挑取血瓊脂平板上分純后的菌落，涂片，進(jìn)行革蘭氏染色，鏡檢。金黃色葡萄球菌為革蘭氏陽(yáng)性菌，排列成葡萄狀，無(wú)芽胞，無(wú)莢膜，致病性葡萄球菌，菌體較小，直徑約為0.5 mm~1 mm。
4、甘露醇發(fā)酵試驗(yàn)：取血瓊脂平板上分純后的菌落接種到甘露醇發(fā)酵培養(yǎng)基中，在培養(yǎng)基液面上加入高度為2 mm~3 mm的滅菌液體石蠟，置36℃±1℃培養(yǎng)24 h±2 h，金黃色葡萄球菌應(yīng)能發(fā)酵甘露醇產(chǎn)酸。
5、血漿凝固酶試驗(yàn)：吸取1:4新鮮血漿0.5 mL，置于滅菌小試管中，加入待檢菌24 h±2 h營(yíng)養(yǎng)肉湯培養(yǎng)物0.5 mL，混勻，置36℃±1℃恒溫箱或恒溫水浴中，每半小時(shí)觀察一次，6 h之內(nèi)如呈現(xiàn)凝塊即為陽(yáng)性。同時(shí)將已知血漿凝固酶陽(yáng)性和陰性菌株的營(yíng)養(yǎng)肉湯培養(yǎng)物及營(yíng)養(yǎng)肉湯培養(yǎng)基各0.5 mL，分別加入無(wú)菌1:4血漿0.5 mL，混勻，作為對(duì)照。也可使用商品化試劑，按照說(shuō)明書(shū)操作，進(jìn)行血漿凝固酶試驗(yàn)。
6、如選擇生化鑒定試劑盒或微生物鑒定系統(tǒng)，可從營(yíng)養(yǎng)瓊脂平板上挑取經(jīng)純化的可疑菌落，用無(wú)菌稀釋液制備成濁度適當(dāng)?shù)木鷳乙海�使用生化鑒定試劑盒或微生物鑒定系統(tǒng)進(jìn)行鑒定。
 
三、檢驗(yàn)結(jié)果報(bào)告
被檢樣品經(jīng)增菌分離培養(yǎng)后，平板上有可疑菌落生長(zhǎng)，經(jīng)染色鏡檢，證實(shí)為革蘭氏陽(yáng)性葡萄球菌，并能發(fā)酵甘露醇產(chǎn)酸，血漿凝固酶試驗(yàn)陽(yáng)性者，可報(bào)告被檢樣品檢出金黃色葡萄球菌。