認知功能障礙是一個全球性的健康問題，預計到2050年，癡呆癥將影響1.52億人。癡呆癥的風險隨著年齡的增長而增加，以及與年齡相關的細胞和分子改變是認知障礙和癡呆癥發展的驅動力。

美國研究人員基于神經血管耦合、功能連通性和腦血管內皮細胞外囊泡作為輕度認知障礙的生物標志物研究。本研究使用納米流式細胞術評估血漿細胞外囊泡(EVs)水平的變化。與CN（對照組）相比，MCI(輕度認知障礙)患者的腦血管內皮EVs (CEEVs)與總內皮EVs的比例增加，這與MCI的結構性MRI(磁共振成像)小血管缺血性損傷有關。NVC（神經與血管的耦合）、CEEVs(腦血管內皮細胞外囊泡)和FC（功能連通性）可以預測MCI的診斷，表明它們有可能作為MCI腦血管病理的標志物。

使用ApogeeFlow Micro-Plus流式細胞儀測量血漿樣品中EVs濃度和比例的差異(補充圖2A)。每天使用含有二氧化硅和聚苯乙/烯珠的微球(ApogeeMix, cat#: 1527, ApogeeFlow, UK)進行儀器的質量控制(補充圖2B)。樣品在1.5 μL/min流速下測定120 s。將樣品稀釋至10,000-20,000事件/s濃度(100- 400倍稀釋)。對于每個受試者，在兩次單獨的測量過程中至少測量了兩種不同比例的血漿。為了評估腦血管源性小泡的血漿濃度，排除了血小板(CD41+)和淋巴細胞(CD3+)陰性事件(補充圖2C-E)。隨后，測定每個測定物雙陽性囊泡(內皮和MAL陽性，CD31+/CD105+/CD144+和MAL+)的濃度(事件/μL)。泛內皮標記物陽性表達、CD3和CD41陰性標記、MAL陽性表達(特異性表達于中樞神經系統內皮細胞而非外周內皮細胞)的EVs與CEEVs區別開來。通過內皮和MAL陽性囊泡的數量除以內皮起源囊泡的總數(內皮+/MAL+除以內皮+/MAL+ +內皮+/MAL−)，并以百分比表示，來評估每個等分的血管囊泡與血管囊泡的比例。

補充圖.2

補充圖2。細胞外囊泡檢測和分析。(A)從患者身上采集血液，根據研究方案進行處理，并引用至100µl直到EV測量。制備EV時，將10µl血漿加入80µl 0.22µl濾過的磷酸鹽(PBS)中，并用10µl抗體混合液(內皮細胞、血小板和淋巴細胞來源)染色。樣品在冰上孵育2小時后，使用apogeflow Micro-Plus流式細胞儀測量EVs的濃度和比例。(B)粒徑為80 ~ 1300 nm的二氧化硅和聚苯乙/烯珠。(C-E)門控血漿和淋巴細胞來源的代表性圖像。(F, G)排除CD41和CD3后CD31+/ CD105+/CD144+和MAL+細胞外囊泡的散點圖。

測定患者血漿中CEEV的比值(%)和血漿濃度(事件/μL)。分析發現，與CN相比，MCI患者血漿中CEEV相對于總內皮囊泡(EEVs)的比例升高， MCI中CEEV濃度升高。

Fig.5

Fig.5。輕度認知障礙(MCI)患者的腦血管內皮細胞外囊泡(CEEVs)增加。年齡匹配對照(CN) (A)和MCI (B) CEEV的散點圖。通過內皮和MAL陽性囊泡的數量除以所有內皮源性囊泡(EEV)的數量(內皮+/MAL+除以內皮+/MAL++內皮+/MAL-)并以百分比表示(C)來評估腦血管與其他血管囊泡的比率。圖C顯示MCI中CEEV%與CN相比顯著增加。圖D顯示，與CN相比，MCI中CEEV濃度(事件/μL)顯著增加。圖E顯示CEEVs在Fazekas評分患者中的分布。CEEV%與WMH負荷增加有顯著相關。

結論
本研究發現，與CN相比，MCI部分患者的NVC（神經與血管的耦合）功能障礙和FC降低。這些發現局限于LDLPFC（左側背外側前額葉皮層）。探索性研究表明，與CN相比，MCI中CEEVs的比例和濃度升高。CEEVs與MCI患者WMH（保健）負擔增加顯著相關。通過穩健的模型和特征選擇，LDLPFC中的NVC和FC以及CEEVs是預測MCI的最重要變量，具有較高的準確性。這些發現揭示了腦血管血流動力學和功能神經元網絡的改變，同時也表明CEEVs是一種潛在的腦血管病理標志物，與MCI參與者的小血管缺血機能密切相關。

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參考文獻：
DO1: 10.1002/alz.14072，RESEARCH ARTICLE
Alzheimer' oDementiaTHE JOURNAL OF THE ALZHEIMER'S ASSOCIATION
Neurovascular coupling, functional connectivity, andcerebrovascularendothelialextracellular vesicles asbiomarkers of mild cognitive impairment
 

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