可以使用不同的方法在細胞單層中創建間隙：

• 插件：通過在細胞接種前將插入物/模板放置在培養表面上來創建物理細胞排除

• 刮擦：通過刮擦表面來機械去除細胞（刮擦測定）

• 阻抗：通過在指定區域施加電壓來去除細胞

有關如何創建間隙的更多詳細信息和方法，請查看此評論：

W.J. Ashby, A. Zijlstra. Established and novel methods of interrogating two-dimensional cell migration. Integr Biol 2012, 10.1039/c2ib20154b

ibidi 提供三種不同的培養插件用于間隙創建：ibidi培養插件 2 孔、3 孔和4 孔。由于特殊設計的底部，培養插件粘附在表面上，防止任何細胞在壁下生長。取出培養插件后，新產生的無細胞間隙（傷口）是干凈的，沒有任何殘留物。該方法允許在沒有任何細胞的情況下可重復地創建高度限定的間隙。

當放置在平坦、干凈的表面上時，Culture-Insert 2 Well提供兩個用于培養細胞的儲液器，兩個儲液器由 500 μm 厚的壁隔開。將細胞接種到儲存器中并培養直至它們附著并形成單層。從表面去除硅膠插件會產生兩個精確定義的細胞斑塊，它們被與分隔壁寬度完全相同的區域分開。現在可以通過使用活細胞成像或在不同時間點拍照來監測細胞遷移。

Culture -Insert 3 Well提供三個細胞培養槽。它創建兩個各 500 µm 的無細胞間隙，因此適合分析兩個技術重復或不同細胞類型的遷移。

Culture -Insert 4 Well提供四個細胞培養槽。除了四個 500 µm 無細胞間隙外，它的中間還包括一個 1 mm 的中心間隙。Culture-Insert 4 Well 允許觀察最多四個技術重復或不同細胞類型的遷移。

使用 ibidi Culture-Insert 4 Well 進行傷口愈合和遷移測定。

培養插件3 孔| 4孔兩者都可以在藥物治療或基因沉默/過度表達（例如，通過 CRISPR/Cas9、siRNA、mRNA）后進行細胞遷移分析。重要的是，未經處理的對照細胞可以在同一容器中接種并分析，共享相同的培養基。

與其他間隙創建技術不同，ibidi 培養插件適用于同時使用兩種、三種甚至四種細胞類型或處理的2D侵襲測定和共培養測定。

進行劃痕測定時，細胞會生長直至形成單層。然后，用移液管尖端或針手動刮擦細胞表面以產生傷口。通過在不同時間點拍照或活細胞成像來監測傷口閉合和細胞遷移。

關于再現性，該方法有一定的缺點：

• 間隙寬度很大程度上取決于施加到移液器尖端的壓力及其尺寸。

• 刮擦會以不可重復的方式去除表面涂層。這改變了該區域的細胞粘附和遷移。

• 去除的細胞以不可重現的方式在劃痕邊緣形成活細胞和死細胞團�；罴毎�的擴散可以覆蓋遷移的速度。

乍一看，刮擦和放置培養插件的方法似乎是兩種非常相似的創建無細胞間隙的方法。然而，仔細觀察，這兩種方法在可能影響測定結果的重要方面存在差異：

與劃痕檢測相比，ibidi 培養插片可提供更高的重現性

由于細胞遷移導致開放區域隨時間變化。使用 ibidi Culture-Insert 2 Well（左）和使用移液器吸頭刮擦（右）創建間隙的比較。數據由德國弗萊堡大學 M. Börries 提供。