細胞生長特性分為兩種,一種是貼壁一種是懸浮,不同的細胞形態對應的操作方法也大有不同,今天我們主要講解一下貼壁細胞的相關培養技巧。
在操作貼壁細胞的過程中,消化環節確實至關重要。消化時間的長短需要根據每個細胞的狀態進行精確調整,以確保細胞的健康和完整性。消化過度或消化不充分都可能對細胞造成不可逆的影響,因此,了解并準確判斷貼壁細胞的狀態對于確定消化時間至關重要。
貼壁細胞狀態,分為以下幾種:
1,疏松貼壁細胞
細胞傳代密度控制在80%左右最少不能低于60%,消化時間控制在1-2分鐘左右,傳代后48小時內不要動該細胞,讓其慢慢貼壁,需要觀察時也要輕拿輕放。
如果在液體中還存在未貼壁的細胞,可以在下次換液時通過離心收集這些細胞。這樣既能保證細胞的充分利用,又能避免未貼壁細胞對實驗結果的干擾。
2,容易分化的細胞
需使用較好的血清培養,盡量讓細胞生長密度高一些,消化時觀察細胞的形態變化,變圓后及時終止消化處理。
減少吹打次數,避免不必要的機械損傷;輕柔吹打,避免氣泡產生,細胞呈單個狀態即可。
3,生長緩慢的細胞
如果細胞突然生長緩慢,需考慮是否是試劑的批次問題,細胞污染等可能性。如果本身細胞生長較慢,需使用較好的血清培養,必要時可加大血清濃度(5%-10%左右),傳代時密度需在80%以上,密度太稀傳代會直接影響細胞的生長周期及狀態,傳代比例控制在1:2或1:3。
4,聚團成長的細胞
聚團成長的細胞不容易生長滿,在長到70%-80%左右就可以傳代,消化時觀察細胞的形態變化,細胞變圓并有少量細胞脫落即可終止消化,較難消化的細胞,可以分次消化,相對增加消化時間。
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