核酸酶的發展歷史及分類

瀏覽次數：614　發布日期：2024-1-29　來源：本站　僅供參考，謝絕轉載，否則責任自負

核酸酶是在核酸分解的第一步中，作用于水解核苷酸之間的磷酸二酯鍵的一種蛋白質。在高等動植物中都有作用于磷酸二酯鍵的。不同來源的核酸酶，其專一性、作用方式都有所不同。有些核酸酶只能作用于RNA，稱為核糖核酸酶（RNase），有些核酸酶只能作用于DNA，稱為脫氧核糖核酸酶（DNase），有些核酸酶專一性較低，既能作用于RNA也能作用于DNA，因此統稱為核酸酶（nuclease）。根據核酸酶作用的位置不同，又可將核酸酶分為核酸外切酶（exonuclease）和核酸內切酶（endonuclease）。

核酸酶歷史

20世紀70年代，在細菌中陸續發現了一類核酸內切酶，能專一性地識別并水解雙鏈DNA上的特異核苷酸順序，稱為限制性核酸內切酶（restrictionendonuclease，簡稱限制酶）。當外源DNA侵入細菌后，限制性內切酶可將其水解切成片段，從而限制了外源DNA在細菌細胞內的表達，而細菌本身的DNA由于在該特異核苷酸順序處被甲基化酶修飾，不被水解，從而得到保護。

核酸酶分類介紹

核酸外切酶

有些核酸酶能從DNA或RNA鏈的一端逐個水解下單核苷酸，所以稱為核酸外切酶。只作用于DNA的核酸外切酶稱為脫氧核糖核酸外切酶，只作用于RNA的核酸外切酶稱為核糖核酸外切酶；也有一些核酸外切酶可以作用于DNA或RNA。核酸外切酶從3′端開始逐個水解核苷酸，稱為3′→5′外切酶，例如，蛇毒磷酸二酯酶即是一種3′→5′外切酶，水解產物為5′核苷酸；核酸外切酶從5′端開始逐個水解核苷酸，稱為5′→3′外切酶，例如：牛脾磷酸二酯酶即是一種5′→3′外切酶，水解產物為3′核苷酸。

核酸內切酶

核酸內切酶催化水解多核苷酸內部的磷酸二酯鍵。有些核酸內切酶僅水解5′磷酸二酯鍵，把磷酸基團留在3′位置上，稱為5′-內切酶；而有些僅水解3′-磷酸二酯鍵，把磷酸基團留在5′位置上，稱為3′-內切酶。還有一些核酸內切酶對磷酸酯鍵一側的堿基有專一要求，例如胰臟核糖核酸酶（RNaseA）即是一種高度專一性核酸內切酶，它作用于由嘧啶核苷酸C‘3處的羥基與下一個核苷酸C5’處的磷酸形成的3‘，5’-磷酸二脂鍵，產物為以3′嘧啶核苷酸結尾的低聚核苷酸和以5’核苷酸開頭的低聚核苷酸。

非特異性核酸酶

20世紀五六十年代，金黃色葡萄球菌、枯草芽孢桿菌等分泌的胞外核酸酶也被陸續分離出來。底物測試發現這些酶對DNA和RNA表現出非專一性，因此被新歸類為非特異性核酸酶。

逐典Pannarase全能核酸酶是一種來源于Serratia marcescens的非特異性核酸內切酶，該酶可以將任何形式的 DNA 和 RNA (線性、環形、超螺旋)降解成3-5bp的寡核苷酸，并可在一系列寬泛的操作條件下保持高效性。逐典全能核酸酶從E.coli中表達純化并在GMP條件下生產，可高效去除各種樣品中的核酸雜質，助力解決廣大疫苗生產、基因和細胞治療廠商解決產品的核酸殘留問題；此外某些病毒生產中可能會涉及到高鹽的環境，逐典Pannarase耐高鹽全能核酸酶將成為您“疑難雜癥”的最佳選擇！

全能核酸酶優勢：

1.無動物源性、無氨芐青霉素

2.杰出單位比酶活、更高效的核酸降解能力

3.先進的生產工藝，非傳統His標簽純化、排除引入金屬離子風險

4.嚴格的質控標準，內毒水平低，確保單位酶活的準確性以及批次間穩定性

全能核酸酶應用條件：

全能核酸酶的酶活會受到多種因素的影響（例如溫度、pH、離子強度等），故用量范圍也會從0.1 U/mL-250 U/mL不等。因此，不同的操作環境下酶的最佳濃度不同，需要通過實驗設置梯度進行最佳條件的摸索。

應用實例：

1.樣品：狂犬病毒濃縮液

處理條件:核酸酶濃度50~90U/ml ,

37 ℃處理 2 h,轉入18 ~ 26 ℃處理 6h