一、概述

細胞尺寸在生物研究中至關重要。越來越多研究揭示了細胞大小和表型特征（如干性特征、增殖能力和代謝狀態）之間復雜的相關性。在生物制造等應用的工藝流程中，細胞大小是評估細胞治療中分批培養或原材料細胞是否健康的關鍵指標。因此，自動細胞計數中可靠的細胞大小測定已成為重要的結果。

點成LUNA-FX7細胞計數儀可精確提供細胞大小的數據。除了所有點成LUNA系列細胞計數儀共有的標準細胞尺寸門控功能外，點成LUNA-FX7計數輸出還包括與每個細胞活力狀態結合的尺寸測定。此外，點成LUNA-FX7具有多種方法來根據計數期間和計數后的大小對細胞群進行分析和分類。在此，我們展示了點成LUNA-FX7在測量細胞尺寸上的準確性和可靠性及其精確的尺寸門控功能。為了評估確定細胞大小的準確性，在明場總細胞計數模式下對六種不同的NIST可追蹤粒度標準品和兩種細胞系AsPC-1(胰腺癌)和DLD-1(結腸癌)進行了計數。

二、實驗過程

1、精確測量各種粒徑

六種不同的NIST可追蹤粒徑標準品(10-46 μm)在點成LUNA-FX7的明場總細胞計數模式下進行計數。測定粒徑的準確度為96.7%以上。相反，市面上大多細胞計數儀對于10 μm或更小和50 μm及更大的顆粒則不準確。

NIST可追蹤粒度標準的尺寸測定。

(A-F)圖像顯示了標記良好的顆粒，表明顆粒直徑尺寸的精確測量。

(G)該表顯示了LUNA-FX7™和競爭對手計數器的測量顆粒尺寸和尺寸測量精度。

2、混合條件下目標尺寸顆粒的計數

為了評估點成LUNA-FX7中尺寸測量的精確性，我們準備了四種不同比例的NIST可追蹤粒徑標準品（~10 μm、20 μm、40 μm和60 μm）的混合物。最初，我們對最小細胞尺寸值為3 μm和最大細胞尺寸值為60 μm的混合顆粒進行計數，該值是根據默認協議進行修改的。計數后，生成細胞濃度與細胞大小的直方圖，并且NIST標準已正確分類。

精確的尺寸測定。

(A) 圖像顯示了標記良好的各種尺寸的顆粒。

(B-C)直方圖指示NIST顆粒按尺寸的準確分布。

執行選定的尺寸門控，生成適合目標尺寸的完美標簽，尺寸測量的準確度超過96.2%。此外，尺寸門控可以輕松應用于點成LUNA-FX7，通過計數前預設的協議，通過計數后立即調整直方圖，或利用具有不同大小參數的協議重新分析存儲的計數數據。

LUNA-FX7™中特定尺寸的門控。

標記的圖像和直方圖顯示，目標尺寸的顆粒（以橙色表示）通過門控進行了集中、選擇性和排他性的檢測。

3、細胞系的計數和尺寸門控應用

最后，我們計數了兩種不同大小范圍的細胞系：AsPC-1（胰腺癌）和DLD-1（結腸癌）。健康的AsPC-1 細胞的尺寸范圍為8 - 40 µm，而健康的DLD-1細胞的尺寸范圍預計較窄，為10 - 20 µm。LUNA-FX7™ 準確捕獲兩個種群的整個大小范圍。

AsPC-1和DLD-1細胞的細胞計數和大小測定。

應用AsPC-1 (A-C)和DLD-1 (D-F)細胞系來確認不同尺寸混合的計數性能。

4、結論

點成LUNA-FX7™有多種方法來測量、區分和確定細胞群的大小。點成LUNA-FX7™具有計數期間和計數后預定義大小門控選項，可靈活評估細胞群的健康狀況和質量。此外，點成LUNA-FX7™的再分析功能可以對下游分析中保存的珍貴計數進行更廣泛的評估。