Comparison and optimization of SAR‐PAGE tests for erythropoietins in doping analysis【WILEY】
興奮劑檢測（SAR-PAGE法測定紅細胞生成素）的條件比較與優化

 

 

促紅細胞生成素(EPOs)刺激紅細胞的生成，增強運動員體能及耐力，屬于世界反興奮劑機構(WADA)清單S2中列出的違禁品。根據目前的WADA技術文件，篩查和確認所有EPOs類型的唯一方法--基于分子量分離的肌氨酰聚丙烯酰胺凝膠電泳(SAR-PAGE)后進行蛋白印跡雜交（Western Blotting）。免疫純化和蛋白轉移的效率對于確保EPOs篩查的選擇性和靈敏度至關重要。本研究對SAR-PAGE步驟進行了一些比較和優化，即根據不同的免疫純化方法，優化第一次印跡實驗的轉膜條件，對尿液和血液樣本的選擇性、重復性和靈敏度進行了比較，同時建立并比較了尿液和血液分析的快速流程。與常用的恒流方法相比，1.0 mA/cm²  進行60 min然后1.56 mA/cm² 進行20 min的兩步轉膜流程可有效提高印跡效率。不同的免疫純化方法在選擇性和敏感性方面無顯著差異。考慮到操作復雜性、時間和成本等因素，對尿液的篩查和確認分別使用StemCell^®純化試劑盒純化后進行單次印跡和磁珠純化后進行雙次印跡。血液樣本的篩查和確認分別使用磁珠和MAIIA^®試劑盒純化后進行雙次印跡。對尿液和血液分析進行雙次印跡的快速流程可確保高靈敏度和高選擇性。

 

研究中使用Blotcycler進行標準印跡雜交替代人工操作，保證嚴格統一的標準程序，有效提高單印跡雜交的穩定性和重復性。

Comparison and optimization of SAR-PAGE tests for erythropoietins in doping analysis
Xinmiao Zhou, Lisi Zhang, Sen He, Li Shen, Chunji He
First published: 30 October 2019
https://doi.org/10.1002/dta.2703

來自美國Precision Biosystems公司的Blotcycler，是一款全自動的蛋白質印跡雜交系統，可自動化完成封閉、孵育、清洗和一抗回收的一系列工作，徹底解放您的雙手。專利的流體清洗減少二抗在膜上的附著，降低背景，提高信噪比和靈敏度；自動化的操作流程避免了手工操作帶來的誤差，保證了批次內和批次間實驗的高度重復性；高通量操作和多條件的設定可以輔助您優化Western Blot 實驗的條件；開放的實驗平臺，無需其他額外投入。Blotcycler是從事Western Blot實驗的科研工作者最佳選擇。

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