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常用的細胞活力檢測方法及優缺點

瀏覽次數:987 發布日期:2023-12-20  來源:本站 僅供參考,謝絕轉載,否則責任自負
一,常用的細胞活力檢測試劑主要有 MTT、CCK8、CTG發光法 等檢測方法

MTT法:又稱 MTT 比色法。其檢測原理為活細胞線粒體中的琥珀酸脫氫酶能使外源性 MTT 還原為不溶于水的藍紫色結晶甲臜 (Formazan) 并沉積在細胞中,但死細胞無此功能,后經 DMSO 溶解,于 490 nm 處測定吸光值便可間接反應細胞活力。但該方法除去操作步驟耗時以外,生成的 Formazan 是不溶于水的,需經 DMSO 溶解后才能檢測,增加了工作量的同時仍不能保證測定結果的準確性,且該溶劑對人體具有明顯毒性。
 

CCK8法:相較于 MTT,無論是操作步驟還是檢測時間都優化了很多。CCK8 是一種基于 WST-8 而廣泛應用于細胞增殖和細胞毒性的快速、高靈敏度、無放射性的比色檢測方法。但在實驗時,一直有個問題讓人很困擾——“細胞增殖越多越快,則顏色越深;細胞毒性越大,則顏色越淺”,但這個顏色深淺的標準我 “標” 不出來怎么辦?痛點!痛點!痛點!
 

CTG 發光法:基于高靈敏度生物發光檢測技術,通過對三磷酸腺苷 (ATP) 進行定量以測定培養物中活細胞數目及細胞活力。該實驗方法可用三個字簡單概括 “快、準、狠”,比 MTT 的處理速度快近 20 倍,節省時間近 4 小時。CTG 特有的均質檢測法即 “加樣-混樣-檢測”,使用時,只需將本試劑等體積添加至培養細胞中即可進行檢測。不用感慨,細胞活力檢測為什么不能如此簡單?


二, MTT、CCK8 與 CTG 法特點比較
 


三,CTG適用于哪些實驗?

首先,來了解實驗 CTG 發光法的測定原理:ATP 作為細胞新陳代謝的一個重要指標,與活細胞數目呈良好的線性關系,是細胞活力檢測的重要標志性分子。

ATP 生物發光的原理為:熒光素酶以熒光素、ATP 和 O2 為底物,在 Mg2+ 存在時,可將化學能轉化為光能;在熒光素酶催化的發光反應中,ATP 在一定的濃度范圍內,其濃度與發光強度呈線性關系,即在光信號與酶反應體系中,發光值與 ATP 呈正比,ATP 與活細胞數成正比,CTG 發光法通過 ATP 含量來進行細胞計數或活力測定,且不受化合物自發熒光的影響 (圖 2),是細胞增殖測定,細胞活力測定和細胞毒性高通量篩選分析的理想選擇。

 

發布者:上海瑋馳儀器有限公司
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