D-熒光素 (D-Luciferin) 是熒光素酶的常用底物。D-熒光素利用熒光素酶報告基因在活體內表達產生的熒光蛋白發生化學反應產生熒光，從而使用高靈敏度的光學檢測儀器檢測動物活體體內的細胞活動和基因行為，普遍應用于生物領域，特別是生物活體成像技術。
 

一，D-螢光素生物發光的作用原理

D-熒光素能夠在熒光素酶和ATP的作用下氧化成 oxyluciferin，在氧化過程中能夠將化學能轉化為光能，從而發出波長為 560 nm 左右的生物熒光 (圖1)。將攜帶熒光素酶編碼基因 (Luc) 的質粒轉染入細胞后，接種到實驗動物 (如小鼠) 體內，當外源 (腹腔或靜脈等注射) 給予其底物D-熒光素，即可通過生物發光成像技術 (BLI) 來檢測光強度變化，從而實時監測疾病發展狀態，或藥物的治療效果等。

二，逐典D-螢光素鉀鹽優勢

1.高純度（HPLC驗證純度≥99%)

2.優異的生物發光性能

3.高溶解度（>40mg/ml)

三，應用場景

D-熒光素鉀鹽在不同領域具有多種應用場景。其中包括蛋白表達研究、抗腫瘤或抗病毒藥物研究以及mRNA疫苗開發等。

蛋白表達研究：將Luc基因插入需要研究的蛋白中，可用于定量目標蛋白在實驗動物體內的表達情況。

抗腫瘤或抗病毒藥物：在腫瘤細胞或病毒中導入Luc基因，建立腫瘤或病毒感染小鼠模型，注射藥物后，通過活體成像技術觀測腫瘤大小或病毒感染的變化。

mRNA疫苗開發：在mRNA中插入Luc基因，脂質體包裹后注射實驗動物后，可通過活體成像技術可觀測疫苗的免疫效果。

四，客戶之聲

五，常見問題答疑

Q:D-螢光素鉀鹽的純度是多少？純度大小對實驗有影響嗎？

A:D-螢光素鉀鹽純度≥99 %，螢光素純度越高，相應污染物含量越低，相反則越高，污染物濃度過高將抑制某些酶和細胞中的生物學過程，可能會給實驗結果帶來偏差，并且可能會對實驗動物造成傷害。

Q:D-螢光素鉀鹽溶解度是多少？其溶液穩定嗎？

A:D-螢光素鉀鹽溶解度在40 mg/ml以上，其水溶液短期內存放于-80℃，對實驗效果沒有明顯影響。對于部分條件較敏感的實驗，為了控制實驗中的可變因素，推薦反應液新鮮配制。例如，熒光素酶過低、非最適的反應條件等都需要高質量的底物才能進行反應。

Q:D-螢光素鉀鹽的建議用量是多少？

A:活體成像：以10 μL/g體重確定注射量。每只小鼠接受150 mg D-螢光素鉀鹽/kg體重（如對于體重為10 g的小鼠，需要注射100 μL以提供1.5 mg D-螢光素鉀鹽）。

體外成像：一般使用150μg/ml的工作液用于體外細胞成像。

Tips: 注射方式、動物類型以及體重等都會影響信號的發射，需要適當摸索，待螢光信號達到最強穩定平臺期，再用相應儀器進行成像分析。

Q:配置好的D-螢光素鉀鹽溶液如何儲存？

A:工作液現配現用，理想情況下，配置好的儲存液可于-20℃儲存較短時間。如有必要，螢光素溶液可在-20℃儲存長達3周。

Tips: 上述溶液在任何一種溫度長時間貯存下都有可能導致信號退化哦！

Q:螢光素（酶）底物的形式有哪些？

A:分為D-螢光素游離酸、D-螢光素鉀鹽和D-螢光素鈉鹽，由于水溶性高，因此鉀鹽和鈉鹽通常是最通用的兩種檢測底物，其中又以鉀鹽作為活體動物檢測使用的主要形式。

Q:如何確定不同模型的峰值信號時間?

A:生物發光信號的動力學具有組織依賴性。建議每5-10min對動物進行一次成像，最多40 min，為每個新模型創建一個動力學曲線。(常見信號峰值時間點在10-15 min左右，螢光反應發光一般在30 min后衰減，3 h后完全消失。)具體詳見逐典D-螢光素鉀鹽說明書“螢光素動力學曲線制備”。

Q:螢光素底物可以透過血腦屏障嗎？

A:螢光素底物約280 Da，螢光素的水溶性和脂溶性都非常好，很容易穿透細胞膜和血腦屏障。

Q:螢光素酶的表達穩定性如何？

A:螢光素酶基因能夠通過穩定篩選等過程插到細胞染色體內，當細胞進行分裂、轉移、分化從而進行持續穩定的表達，螢光素酶的半衰期約為3 h，故只有活細胞才能持續表達螢光素酶。