快速流式細胞儀助力疾病的個性化診斷
Moxi Go II快速流式細胞儀助力疾病的個性化診斷
傳染性疾病的個性化診斷：需要持續監測疾病的動態發展，目前推薦的臨床策略即收集患者的關鍵生物標志物的多重數據，并對其進行縱向頻繁監測。現在諸多技術，如流式細胞術、靜態顯微鏡等，都可以進行樣本監測分析，但是檢測量有限，無法滿足生物標志物多重檢測的需求，而且設備操作和數據處理都很復雜。我們需要一種設計簡潔，數據處理簡單，可同時針對多種物種的生物標志物靶向的檢測方案。
作為一種革命性的工具，阻抗細胞術設計簡潔，可直接或間接對微米及納米級樣本顆粒進行檢測而不破壞樣本，已廣泛應用于多個領域，尤其是細胞狀態評估和疾病診斷。然而， 該技術在識別多個物種時，需要在準確性和快速分析之間進行權衡。這對于復雜疾病進行個性化患者分層，需要同時多重生物標志物檢測來講，仍然存在困境。
來自新澤西州立大學的Brandon K Ashley團隊研究了一種新的多路阻抗細胞術機制，采用電敏感微粒，使用單一檢測源靶向、識別白細胞上的膜受體，相關研究成果以“Antibody-functionalized aluminum oxide-coated particles targeting neutrophil receptors in a multifrequency microfluidic impedance cytometer“為題，于2022年發表在《Lab chip》上。
這項研究使用了一種涂有不同厚度金屬氧化物（10nm和30nm的Al2O3）的Janus顆粒（metal oxide-coated Janus particles，MOJPs），當它進入電場時，會置換相同體積的電介質液體，改變系統的阻抗，產生可量化檢測的阻抗偏移。每個MOJP在不同的輸出頻率下都有一個特定幅度的偏移，使用多頻阻抗細胞術，可以通過一種共面電極方案快速測量和區分這些顆粒。研究者用CD11b抗體功能化10nm厚度的MOJPs，用 CD66b抗體功能化30nm厚度的MOJPs，然后將顆粒與分離的中性粒細胞結合以測量受體的表達，所得結果同時與流式細胞檢測結果進行對比。研究發現包括多元分析、監督機器學習和無監督機器學習在內的數據分析技術的組合能夠準確區分樣本，準確率高達91%。
本研究中流式分析檢測采用了Orflo Technologies公司的Moxi Go II快速流式細胞儀。按照廠商提供的protocol，將20μL等分的FITC-CD66b抗體或PE-CD11b抗體溶液加入到100μL 1X PBS（約1.0x105個細胞/mL）稀釋的中性粒細胞中，避光孵育。在Moxi Go II上選擇“Open Flow Cytometry”，選擇FITC通道和PE通道，在設備完成自動校準后，上樣60μL樣品。檢測結果如圖1和表1所示。
來自新澤西州立大學的Brandon K Ashley團隊研究了一種新的多路阻抗細胞術機制，采用電敏感微粒，使用單一檢測源靶向、識別白細胞上的膜受體，相關研究成果以“Antibody-functionalized aluminum oxide-coated particles targeting neutrophil receptors in a multifrequency microfluidic impedance cytometer“為題，于2022年發表在《Lab chip》上。
這項研究使用了一種涂有不同厚度金屬氧化物（10nm和30nm的Al2O3）的Janus顆粒（metal oxide-coated Janus particles，MOJPs），當它進入電場時，會置換相同體積的電介質液體，改變系統的阻抗，產生可量化檢測的阻抗偏移。每個MOJP在不同的輸出頻率下都有一個特定幅度的偏移，使用多頻阻抗細胞術，可以通過一種共面電極方案快速測量和區分這些顆粒。研究者用CD11b抗體功能化10nm厚度的MOJPs，用 CD66b抗體功能化30nm厚度的MOJPs，然后將顆粒與分離的中性粒細胞結合以測量受體的表達，所得結果同時與流式細胞檢測結果進行對比。研究發現包括多元分析、監督機器學習和無監督機器學習在內的數據分析技術的組合能夠準確區分樣本，準確率高達91%。
本研究中流式分析檢測采用了Orflo Technologies公司的Moxi Go II快速流式細胞儀。按照廠商提供的protocol，將20μL等分的FITC-CD66b抗體或PE-CD11b抗體溶液加入到100μL 1X PBS（約1.0x105個細胞/mL）稀釋的中性粒細胞中，避光孵育。在Moxi Go II上選擇“Open Flow Cytometry”，選擇FITC通道和PE通道，在設備完成自動校準后，上樣60μL樣品。檢測結果如圖1和表1所示。
圖1. Moxi Go II檢測結果：CD11b表達（用藻紅蛋白或PE染色）和CD66b表達（用異硫氰酸熒光素或FITC染色）的流式細胞檢測散點圖
| No expression (Q1) | CD11b+ only (Q2) | CD66b+ only (Q3) | CD11b+ & CD66b+ (Q4) |
| 35.3% | 27.7% | 4.3% | 32.7% |
表1. Moxi Go II檢測結果：CD11b、CD66b受體單獨表達或都表達的中性粒細胞百分比
這項概念研究證明了氧化物涂層顆粒對特定白細胞計數的潛力，不同的涂層厚度或不同的金屬氧化物材料，有望在同一樣品中測量不同的細胞和不同的細胞受體。此系統樣本處理簡單，可以更快速，更自動化地分析生物標志物，具有更高的多重分析潛力，可能會改善重癥監護中的疾病診斷。
Moxi GO II采用庫爾特原理進行細胞計數和粒徑測量，同時采用488nm激光光源，結合兩個PMT通道，525/45nm通道和561nm/LP（或者646nm/LP，可根據需要更換），進行細胞活率、細胞凋亡、轉染效率、活性氧簇、線粒體膜電位等常規流式檢測。
儀器設計小巧輕便，無需預熱，開機即用，預設程序，觸屏操控，運行后10秒即可給出測試結果，使用后也無需清潔維護。無論是經驗豐富的流式專家，還是初試身手的實驗小白，Moxi Go II都可以助您輕松完成實驗。
環亞生物，生命科學產品全國性代理商，不斷把國外頂級的創新產品引入中國。環亞生物具備完善的公司運營、產品管理、營銷、售前技術支持和售后維修體系。環亞生物作為Orflo Technologies大中華區獨家代理商，負責Orflo產品大中華區的營銷和售后支持。
更多資訊請訪問文獻全文鏈接：
https://pubs.rsc.org/en/content/articlelanding/2022/lc/d2lc00563h
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儀器設計小巧輕便，無需預熱，開機即用，預設程序，觸屏操控，運行后10秒即可給出測試結果，使用后也無需清潔維護。無論是經驗豐富的流式專家，還是初試身手的實驗小白，Moxi Go II都可以助您輕松完成實驗。
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