細胞培養基的發展歷史、作用及如何進行合適選擇的介紹
瀏覽次數:1603 發布日期:2023-9-14
來源:本站 僅供參考,謝絕轉載,否則責任自負
細胞培養基發展史
1、天然細胞培養基階段
人們早期的細胞培養基,直接采用某些組織凝塊,動物組織提取液或體液,如血漿凝塊、血清、淋巴液、胚胎浸出液等。
1885 年 Roux 用溫生理鹽水培育雞胚組織,使之存活數天,這是記錄最早的組織培養。
1907 年美國胚胎學家 Harrison 在無菌環境下以淋巴液為培養基培養蛙胚神經成功,創立了體外培養方法。
此后科學家陸續開展了對于維持細胞生長的營養成分的研究,由于當時的條件限制,并沒有穩定的發展起來,但這些為合成細胞培養基階段打下了一定的基礎。
2、合成細胞培養基階段
合成細胞培養基化學成分明確,組分穩定,主要包括糖類、必需氨基酸、維生素、無機鹽類等,它是根據已知細胞所需的營養物質嚴格配制的。
最早的是 1950 年的 199 細胞培養基,至今合成細胞培養基發展已有幾十種,除了沿用半個世紀的基礎合成細胞培養基之外,近年來還出現了營養成分更加豐富的低血清細胞培養基。
在動物細胞培養中最常用基礎細胞培養基有 6~7 種,如 BME、MEM、DMEM、HAM F12、PRMI1640、199 等。
由于天然培養基的一些營養成分不能被合成細胞培養基完全代替,因此一般需在合成細胞培養基中添加 5%~10%的小牛血清。小牛血清的加入對細胞培養非常有效,但小牛血清的成分復雜,這對培養產物的分離純化和檢測會帶來一定的不便。
3、無血清細胞培養基階段
血清對于在傳統培養基配方中生長和增殖的大多數細胞系來說是必不可少的。然而,伴隨血清的使用也帶來了很多的問題。在合成細胞培養基的基礎上,在使用中不添加血清的細胞培養基,且其組成成分不含有任何動物組分,使培養基既能滿足細胞培養所需的營養,又能避免血清帶來的問題。
無血清細胞培養基按照其組分分類,還可以分為無動物組分無血清細胞培養基和化學限定無血清細胞培養基,前者組分中可能含有某些植物來源成分,而后者完全由化學成分明確的組分組成。
目前許多公司都針對特定的細胞開發出一系列的無血清細胞培養基,例如弗元生物的干細胞培養基,為研究人員更好的開展相關研究帶去了便利。
細胞培養基的作用
細胞培養基是細胞培養的基礎,它為動物細胞的健康快速成長提供營養物質。所以只要用到細胞來制造生物技術產品,細胞培養基的重要作用就無可替代。
細胞培養基的主要成份是水、氨基酸、維生素、碳水化合物、無機鹽和其它一些輔助營養物質。傳統的合成細胞培養基會添加一定量的血清,低血清細胞培養基或是無血清細胞培養基則在合成細胞培養基的基礎上,通過調整營養成份配比或含量,或者添加一些血清替代因子。
細胞培養基含有充分的營養物質,滿足完成新細胞合成、細胞代謝等生化反應所需要的物質和能量。另外為合適的細胞培養基 pH 、緩沖能力、滲透壓 、粘滯性及表面張力也是細胞正常生長發育的關鍵。
如何選擇合適的細胞培養基
目前市面上的培養基種類非常豐富,生產廠家五花八門。在開展細胞實驗前,對于細胞培養基的選擇,有些朋友可能比較苦惱。那么在這點上,我們到底要怎么做呢,下面給大家分享一下我的方法。
對于購買的新細胞株,可以要求出售單位提供合適培養基信息。
一些特定的實驗所需細胞,可以根據細胞株的特點和實驗需求查閱文獻,參考別人的經驗,選擇適合的培養基。
如果沒有相關文獻支持,可以選擇多種培養基共同培養目的細胞,觀察其生長狀態,做一些生長曲線或集落形成等指標,根據這些選擇合適的培養基。
對于重要的實驗,在選擇細胞培養基上,可以選擇一些口碑較好的公司所產的培養基,或者是目的細胞出售單位配套的培養基,一般這樣可以避免由于培養基質量問題帶來的實驗誤差,給實驗的順利進行奠定基礎。