原代培養是直接從生物體獲取組織或器官的一部分進行培養，也稱初代培養。嚴格地說即從體內取出組織接種培養到第一次傳代階段，但實際上，通常把第一代至第十代以內的培養的細胞統稱為原代細胞。一般持續1-4周。此期細胞呈活躍的移動，可見細胞分裂，但不旺盛。
 
   原代細胞與體內原組織在形態結構和功能活動上相似性大。由于培養的細胞剛剛從活體組織分離出來，故更接近于生物體內的生活狀態。這一方法可為研究生物體細胞的生長、代謝、繁殖提供有力的手段。同時也為以后傳代培養創造條件。
    原代培養的過程指動物的組織或器官從機體取出后，經機械法或各種酶類（常用胰蛋白酶）和鰲合劑（常用EDTA）處理，使之分散成單個細胞，加入適量培養基，置于合適的培養容器中，在無菌、適當溫度和一定條件下，使之生存、生長和繁殖的過程。
 
   常見的原代細胞類型：上皮細胞、內皮細胞、成纖維細胞、角質形成細胞、黑色素細胞、神經元、星形膠質細胞、肝細胞、骨骼肌細胞、平滑肌細胞、成骨細胞、肌細胞、軟骨細胞、脂肪細胞、滑膜細胞、毛細胞、血細胞、干細胞。
 
原代細胞分離注意事項
1.組織塊培養法
（1）組織塊接種后的前3天，在觀察和移動的過程中，注意不要引起液體的振蕩。要避免經常翻動和振動，否則組織塊不易附著于瓶壁上或附著后也會脫落飄起。
（2）加入的培養液不宜過多，避免浸泡的組織塊受輕微的波動而脫落下來。
（3）當細胞向外遷徙出來后要注意記錄并去除漂浮的組織塊和殘留的細胞，它們產生的有毒物質會影響原代細胞的生長。
（4）為促進組織塊盡快粘貼在培養瓶皿上，可以在種植前先將膠原薄層涂在培養瓶底壁上。
 
 
2.貼壁型原代細胞
 
（1) 原代培養的分離細胞在初次接觸體外環境時，它們之間會互相影響，在這些細胞之間能產生一些促生長的活性物質，使細胞彼此互相促進存活和生長。如果接種的細胞密度過低，細胞之間的促生長作用很小，也很難使細胞適應從體內的組織環境到被分散后進入獨立生存環境的變化過程。如果接種的細胞密度過大，會導致營養物質供應不足，代謝廢物積累較快需要經常換液和傳代。
 
（2）適當增大原代培養接種的細胞密度，給培養的細胞提供更多的類似于在體內時細胞之間的相互作用，會極大提高原代培養的細胞在體外存活率。待細胞適應體外環境后進行傳代培養時再以較低的密度接種和培養。
 
（3）盡快使接種的細胞貼壁，是決定培養能否成功的關鍵。可以在接種后先將培養瓶置培養箱內培養3h到5h，待細胞貼壁后，再補足培養液繼續培養。
 
 
3.懸浮型原代細胞
 
(1）必須保持細胞的懸浮狀態。可以通過增加培養液的黏度來幫助細胞呈懸浮狀態，如給培養液中加入低濃度的透明質酸復合物。在有攪拌裝置的培養器皿內加入培養液是，以5ml為最低限度，否則攪拌時會產生氣泡對細胞造成傷害。使用這種方式需注意勿使攪拌速度過快，否則即可使培養液溢出又容易造成污染。如果培養液的量在5ml以下，可以采用旋轉瓶培養。給懸浮培養的細胞換液時要注意不要吸出細胞。
 
(2）能夠進行懸浮培養的細胞，其生命力一般都比較旺盛，體外分裂增殖的速度較快，營養成分消耗大，換液時間隔一般較短。