產品概述 product description
中性紅法細胞增殖及細胞毒性檢測試劑盒是利用細胞對中性紅的攝入能力來檢測細胞增殖或細胞毒性。中性紅可以被活細胞所攝入，并在溶酶體中積累。在細胞增殖加快時，細胞數量增多，可以攝入的中性紅的量就會增加。在細胞受到損傷時，中性紅的攝入能力會下降。這樣通過對于中性紅攝入量的不同就可以確定細胞的增殖或毒性情況。 可以提供細胞凋亡、增殖、毒性、活性氧、細胞代謝、氧化應激、細胞膜流動性、膜通透性轉換孔、細胞耗氧率、細胞內pH、細胞粘附、細胞自噬等數百種檢測試劑盒產品。

保存溫度
2-8℃避光

注意事項
1.低溫保存后染色液可能出現結晶沉淀。
2.出現結晶可以37℃水浴溶解。

有效期
一年

檢測方法
酶標儀

適用樣本
動物細胞

產品應用
酶標儀

儀器準備
1.帶有450nm濾光片的酶標儀 2. CO2培養箱

試劑準備
1.PBS 2.純水

耗材準備
1.移液器及吸頭 2.96孔培養板

使用注意事項
1.中性紅染色液存放后會產生沉淀。出現結晶可以37℃水浴后搖勻溶解。染液是過量的，也可以直接吸取染色液的上清液使用，也可以使用針頭濾器等過濾去除沉淀后繼續使用，不會影響使用效果。
2.96孔板在細胞培養過程中會存在蒸發問題。在加入中性紅染色液前，如果培養液存在明顯的蒸發問題，會影響細胞的生長狀態，并嚴重影響后續的檢測結果。
3.部分藥物可能對檢測有影響，有影響時需換液后檢測，無影響時直接檢測。用培養基或PBS來配制待檢測藥物，加入中性紅試劑，測藥物溶液在540處的吸光度。如果該吸光度與不含藥物僅加中性紅試劑的培養基或PBS吸光度差異不大，則可以直接加入中性紅，如果吸光度相對較大，則需要除去培養基，并用新鮮培養基洗滌細胞兩次，然后加入新的200ul培養基和20ul 中性紅進行檢測。
4.如果樣品為高渾濁度的細胞懸液，或者為了去除其它顏色物質的影響，建議設定690 nm作為參比波長，以OD540扣除參比波長的O.D值即可。

使用方法
活性測定使用方法：
1. 收集細胞，加細胞懸液200ul（約10000個細胞）到96孔板（邊緣孔用無菌水或PBS填充）。每板設對照（加200l培養基）。
2. 置37℃，5% CO2孵育過夜，倒置顯微鏡下觀察。
3. 每孔加入10 ul 待檢測藥物溶液， 37℃孵育。
4. 至待檢測時間點，每孔加入20 ul 中性紅溶液，37℃孵育1-4 小時。
5. 移除含有中性紅染色液的細胞培養基，用PBS、DPBS或HBSS等適當溶液洗滌1-2次。
6. 加入200微升中性紅檢測裂解液，室溫搖床上裂解20分鐘。在搖床上搖動可以促進樣品的裂解。
7. 測定540 nm各孔的吸光值。
8. 同時設置空白孔（培養基和中性紅溶液，無細胞），對照孔（不加藥培養基和中性紅溶液，有細胞），每組設定3-5復孔。

結果分析 ：
細胞活力計算：
將各測試孔的OD值減去調零孔OD值或對照孔OD值。各重復孔的OD值取平均數。
細胞活力% =（加藥細胞OD-空白OD/對照細胞OD-空白OD）×100

常見問題分析
1.檢測時需要換液嗎？
如果待測藥物有還原性，需要換液，否則不需要。
2.如何判斷待測藥物是否含有還原性？
測定不含細胞，僅含有待測藥物的溶液加入中性紅反應后的在540 nm處的空白吸光度。如果該吸光度很小，說明待測藥物沒有還原性或還原性很小，對中性紅沒有影響，則可以不換液，在培養基中直接加入中性紅 ；如果吸光度相對較大，說明藥物具有較強的還原性，則需要除去含藥物的培養基，并用新鮮培養基洗滌細胞兩次，然后加入新的200 μl培養基和20 μl 中性紅進行檢測。