Annexin V-Cy5在檢測細胞中膜聯蛋白和磷脂酰絲氨酸結合活性上的應用
Annexin V-Cy5標記是美國AAT Bioquest研發的用于檢測細胞功能的探針，膜聯蛋白是鈣依賴性磷脂結合蛋白家族。跟著百螢一起來看看Annexin V-Cy5標記是怎么工作的吧！
1. Annexin V-Cy5標記簡介和工作原理
細胞凋亡是細胞的基本特征之一，它在機體的胚胎發育、組織修復、內環境的穩定和一些疾病發生過程等方面起著十分重要的作用。 在正常細胞中，磷脂酰絲氨酸（PS）只分布在細胞膜脂質雙層的內側，而在細胞凋亡早期，細胞膜中的磷脂酰絲氨酸（PS）由脂膜內側翻向外側。在體內，巨噬細胞可以識別翻轉到細胞膜表面的PS 從而將這些程序性死亡的細胞清除，因此凋亡過程中并不伴隨局部的炎癥反應，而在細胞壞死的過程中則常常伴隨著炎癥反應。 AnnexinⅤ是一種分子量為35-36kD的Ca2+依賴性磷脂結合蛋白，能與細胞凋亡過程中翻轉到膜外的PS高親和力特異性結合。PS 外翻發生在細胞核破裂，DNA 片段化以及凋亡相關蛋白出現之前，這使得Annexin V 與PS 的結合成為凋亡早期的一種重要檢測標志事件。
2.Annexin V-Cy5標記參數
Ex(nm) 656
Em(nm) 670
分 子 量 ~36000
溶 劑 Water
存儲條件 在零下15度以下保存，避免光照
3.Annexin V-Cy5標記特點
方便：可用流式細胞儀或熒光顯微鏡檢測；
快速：1小時內即可完成實驗；
準確：能準確區分活細胞、凋亡細胞和壞死細胞，并計數各群細胞的比例。
4.Annexin V-Cy5標記數據分析
下圖是使用流式細胞儀檢測膜聯蛋白V-mFluor Violet 450與磷脂酰絲氨酸在Jurkat細胞凋亡中的結合活性的實例。 在活的非凋亡細胞中，膜聯蛋白V-mFluor Violet 450檢測非誘導細胞中的先天性細胞凋亡，其通常為所有細胞的2-6％。 在凋亡細胞中，膜聯蛋白V-mFluor Violet 450與磷脂酰絲氨酸結合，磷脂酰絲氨酸位于細胞膜的外部小葉上，導致染色強度增加。
圖1.在Jurkat細胞中檢測膜聯蛋白VmFluor Violet 450和磷脂酰絲氨酸的結合活性。 將Jurkat細胞在37℃，5％CO2培養箱中不用（藍色）或用1μM星形孢菌素（紅色）處理5小時，然后用Annexin V-mFluor Violet 450染色30分鐘。 使用FACSCalibur（Becton Dickinson，San Jose，CA）流式細胞儀，使用紫外激光在Ex / Em = 405 / 450nm下測量膜聯蛋白V-mFluor Violet 450的熒光強度。
5.參考文獻
Resources-Application Notes Phenotypic and Epigenetic Mechanism of Action Determinations of Histone Methylase and Demethylase Inhibitors using Digital Widefield Microscopy
Authors: Brad Larson, Peter Banks
Journal: Experimental Biology (2017)
Targeted Magnetic Intra-Lysosomal Hyperthermia produces lysosomal reactive oxygen species and causes Caspase-1 dependent cell death
Authors: Pascal Clerc, Pauline Jeanjean, Nicolas Halalli, Michel Gougeon, Bernard Pipy, Julian Carrey, Daniel Fourmy, Véronique Gigoux
Journal: Journal of Controlled Release (2017)
1. Annexin V-Cy5標記簡介和工作原理
細胞凋亡是細胞的基本特征之一，它在機體的胚胎發育、組織修復、內環境的穩定和一些疾病發生過程等方面起著十分重要的作用。 在正常細胞中，磷脂酰絲氨酸（PS）只分布在細胞膜脂質雙層的內側，而在細胞凋亡早期，細胞膜中的磷脂酰絲氨酸（PS）由脂膜內側翻向外側。在體內，巨噬細胞可以識別翻轉到細胞膜表面的PS 從而將這些程序性死亡的細胞清除，因此凋亡過程中并不伴隨局部的炎癥反應，而在細胞壞死的過程中則常常伴隨著炎癥反應。 AnnexinⅤ是一種分子量為35-36kD的Ca2+依賴性磷脂結合蛋白，能與細胞凋亡過程中翻轉到膜外的PS高親和力特異性結合。PS 外翻發生在細胞核破裂，DNA 片段化以及凋亡相關蛋白出現之前，這使得Annexin V 與PS 的結合成為凋亡早期的一種重要檢測標志事件。
2.Annexin V-Cy5標記參數
Ex(nm) 656
Em(nm) 670
分 子 量 ~36000
溶 劑 Water
存儲條件 在零下15度以下保存，避免光照
3.Annexin V-Cy5標記特點
方便：可用流式細胞儀或熒光顯微鏡檢測；
快速：1小時內即可完成實驗；
準確：能準確區分活細胞、凋亡細胞和壞死細胞，并計數各群細胞的比例。
4.Annexin V-Cy5標記數據分析
下圖是使用流式細胞儀檢測膜聯蛋白V-mFluor Violet 450與磷脂酰絲氨酸在Jurkat細胞凋亡中的結合活性的實例。 在活的非凋亡細胞中，膜聯蛋白V-mFluor Violet 450檢測非誘導細胞中的先天性細胞凋亡，其通常為所有細胞的2-6％。 在凋亡細胞中，膜聯蛋白V-mFluor Violet 450與磷脂酰絲氨酸結合，磷脂酰絲氨酸位于細胞膜的外部小葉上，導致染色強度增加。
圖1.在Jurkat細胞中檢測膜聯蛋白VmFluor Violet 450和磷脂酰絲氨酸的結合活性。 將Jurkat細胞在37℃，5％CO2培養箱中不用（藍色）或用1μM星形孢菌素（紅色）處理5小時，然后用Annexin V-mFluor Violet 450染色30分鐘。 使用FACSCalibur（Becton Dickinson，San Jose，CA）流式細胞儀，使用紫外激光在Ex / Em = 405 / 450nm下測量膜聯蛋白V-mFluor Violet 450的熒光強度。
5.參考文獻
Resources-Application Notes Phenotypic and Epigenetic Mechanism of Action Determinations of Histone Methylase and Demethylase Inhibitors using Digital Widefield Microscopy
Authors: Brad Larson, Peter Banks
Journal: Experimental Biology (2017)
Targeted Magnetic Intra-Lysosomal Hyperthermia produces lysosomal reactive oxygen species and causes Caspase-1 dependent cell death
Authors: Pascal Clerc, Pauline Jeanjean, Nicolas Halalli, Michel Gougeon, Bernard Pipy, Julian Carrey, Daniel Fourmy, Véronique Gigoux
Journal: Journal of Controlled Release (2017)
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