血清沉淀現(xiàn)象原因與應對方法詳解
血清中經(jīng)常會出現(xiàn)肉眼可見的沉淀，產(chǎn)生的原因有很多。當血清中沉淀太多，不免讓人擔心影響細胞狀態(tài)。今天，希爾博士學堂就圍繞血清沉淀，逐一解開大家心中的疑惑。
■ 纖維蛋白（Fibrin）
血清中肉眼可見的沉淀物大多屬于這一類型。由于在生產(chǎn)過程中，血清采集、過濾(3次0.1μm過濾）和灌裝處理都是在低溫條件下快速完成, 此時血清中纖維蛋白原處于溶解狀態(tài)。但在解凍之后, 血清中纖維蛋白原往往會發(fā)生凝集形成肉眼可見的沉淀。
■ 磷酸鈣（Calcium Phosphate）
常見的一種沉淀物，會造成血清渾濁，并且在37℃培養(yǎng)的時候會增加。這種沉淀物在倒置顯微鏡下觀察像小黑點，并且由于布朗運動看上去像在活動，因此經(jīng)常被誤認為是微生物污染。
■其他成分（Other）
血清中的其他成分也會形成沉淀，例如膽固醇和其他蛋白沉淀等。
我們可以通過將血清接種在細菌培養(yǎng)基上進行培養(yǎng)，觀察是否存在細菌增殖，并且進行革蘭氏染色，觀察判斷是否為微生物污染。
2 不宜37℃預熱，血清和完全培養(yǎng)基通常室溫預熱即可；
3 避免反復凍融；
4 避免紫外線照射；
5 避免2-8℃長期保存，分裝后-20℃長期保存，按需溶解。
血清是什么？
血清，指血液凝固后，在血漿中除去纖維蛋白原及某些凝血因子后分離出的淡黃色透明液體或指纖維蛋白原已被除去的血漿。其主要作用是為細胞培養(yǎng)提供基本營養(yǎng)物質、提供激素和各種生長因子、提供結合蛋白、提供促接觸和生長因子，使細胞貼壁免受機械損傷、對培養(yǎng)中的細胞起到某些保護作用。作為培養(yǎng)細胞的好幫手，血清的品質決定了細胞培養(yǎng)的成敗。血清沉淀是什么？
在血清解凍后發(fā)現(xiàn)渾濁及絮狀物質時，不必驚慌，這是正常現(xiàn)象。常見血清的沉淀物有以下幾種：■ 纖維蛋白（Fibrin）
血清中肉眼可見的沉淀物大多屬于這一類型。由于在生產(chǎn)過程中，血清采集、過濾(3次0.1μm過濾）和灌裝處理都是在低溫條件下快速完成, 此時血清中纖維蛋白原處于溶解狀態(tài)。但在解凍之后, 血清中纖維蛋白原往往會發(fā)生凝集形成肉眼可見的沉淀。
■ 磷酸鈣（Calcium Phosphate）
常見的一種沉淀物，會造成血清渾濁，并且在37℃培養(yǎng)的時候會增加。這種沉淀物在倒置顯微鏡下觀察像小黑點，并且由于布朗運動看上去像在活動，因此經(jīng)常被誤認為是微生物污染。
■其他成分（Other）
血清中的其他成分也會形成沉淀，例如膽固醇和其他蛋白沉淀等。
血清產(chǎn)生沉淀的機理
- 血清沉淀的形成機理多種多樣，具體的機理尚不十分明確。
- 血清沉淀的多少與血清質量不成正比。如有血清沉淀產(chǎn)生，不必擔憂，通常若想去除沉淀，我們建議您采用2000 rpm離心5 min，去除大顆粒沉淀，取上清液使用即可。
- 血清不建議過濾后使用，過濾可能會導致血清中部分營養(yǎng)成分的流失。
血清沉淀是污染嗎？
前面提到過磷酸鈣在倒置顯微鏡下像小幅振動的小黑點，容易被誤認為是微生物污染，但其實血清沉淀并不是污染。由于在37℃的溫度下培養(yǎng)，會加劇磷酸鈣顆粒產(chǎn)生，故空培血清驗證污染的方法也不太合理。我們可以通過將血清接種在細菌培養(yǎng)基上進行培養(yǎng)，觀察是否存在細菌增殖，并且進行革蘭氏染色，觀察判斷是否為微生物污染。
血清沉淀會影響細胞生長嗎？
血清出現(xiàn)沉淀是血清的正常特性，各大品牌的血清均有沉淀的出現(xiàn)，根據(jù)逍鵬多年細胞培養(yǎng)測試經(jīng)驗，血清沉淀的多少與血清的使用效果沒有必然關系。建議更換新批次血清的時候，取少量細胞進行試培養(yǎng)，以確定是否影響后續(xù)細胞生長。如何避免沉淀出現(xiàn)？
正確的解凍方法
- 應按照逐步解凍的方式正確解凍血清：從-20℃取出后，置于4℃冰箱緩慢解凍，最后置于室溫完成解凍。
- 在解凍過程中，請注意時不時緩慢搖晃瓶子，減少沉淀的產(chǎn)生。
- 為避免反復凍融，建議您將血清分裝使用。
- 直接室溫或者水浴溶解均易造成沉淀增多。
正確使用和保存
1 非必須不用熱滅活（熱滅活會使血清中部分蛋白質變性析出，影響血清品質）；2 不宜37℃預熱，血清和完全培養(yǎng)基通常室溫預熱即可；
3 避免反復凍融；
4 避免紫外線照射；
5 避免2-8℃長期保存，分裝后-20℃長期保存，按需溶解。
總結
血清產(chǎn)品中出現(xiàn)沉淀屬于常見現(xiàn)象，無需過多擔心，并且不會影響血清的品質，對細胞培養(yǎng)而言，也是沒有任何問題的，您可以放心使用。本期的希爾博士學堂結束了，我們下期再見！
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