導讀：

血清、血漿典型體液是否需要去高豐度？如何去除高豐度蛋白？不同去高豐度蛋白的優劣勢？最常使用的去高豐度蛋白方法？

血清、血漿等典型體液是目前蛋白質組學研究領域中的常客，這類樣本含有種類豐富的蛋白質，其中高豐度蛋白比例達到97%~99%，且其中蛋白豐度跨越12個數量級，包括白蛋白、IgG、IgA、纖維蛋白原、轉鐵蛋白、觸珠蛋白、抗胰蛋白酶等。

在質譜系統中對于信號的檢測是有傾向性的，往往是相對強度高的信號才更容易被檢測到。在目前研究中，由于低豐度蛋白才往往是疾病特異性生物標志物。如果不將高豐度蛋白質在檢測之前去除，低豐度蛋白質在其信號壓制下很難檢測。因此從復雜樣品中將高豐度蛋白質去除是檢測低豐度蛋白質的一個前提條件。

如何去除高豐度蛋白？目前常用的去除高豐度蛋白的方法有哪些？最常用的方法是什么？針對這一熱點，開發的技術研究也是層出不窮。部分熱點類的方法您將在這篇文章中尋找到答案...

01,ProteoExtract™高豐度蛋白去除試劑盒（德國默克公司）

該試劑盒提供了一種快速、可重現且高度特異性的方法，可同時去除血漿或血清等體液樣本中的血清白蛋白和IgG，使樣品復雜性顯著降低，可檢測低豐度蛋白。該試劑盒中每個柱子含有親和樹脂混合物，該樹脂混合物能與血清白蛋白和IgG高度特異性結合，與其他血清蛋白的結合度非常低。每根柱子能去除血漿中80%的血清白蛋白和IgG，每個柱子吸附量高達2mg白蛋白和0.7mgIgG。

該試劑盒已針對從人類樣品中去除白蛋白進行了優化，結合其他物種的白蛋白。下表顯示了將試劑盒用于不同物種樣品的一些指南：
 

02,多重親和去除系統（安捷倫公司）

圖1 | 多重親和去除系統

該系統中以Human 14最為常用，H14多重親和去除柱與多重親和去除系統一同使用時，可去除約 94% 的總蛋白（血清蛋白、IgG、抗胰蛋白酶、IgA、轉鐵蛋白、觸珠蛋白、纖維蛋白原、α2-巨球蛋白、α1-酸性糖蛋白、IgM、載脂蛋白 AⅠ、載脂蛋白 AⅡ、補體 C3 和甲狀腺素運載蛋白），去除這些蛋白質可有效擴展分析的動態范圍，改善隨后進行的 LC-MSMS 和電泳樣品分析。經過優化可用于分析人體生理體液樣品，與大多數 LC 或 HPLC 泵或儀器兼容。

圖2 | 高豐度蛋白親和去除原理
 

03，Proteominer(bio-rad公司)
Proteominer(bio-rad公司)原理是：通過一個六肽配基與高豐度蛋白結合，從而進行去除。這種方法是非抗體型的，沒啥特異性，它不受物種限制和樣品類型限制。當樣品進來時，六肽配基會優先結合豐度高的蛋白質，豐度低的結合的機會小很多，于是就達到了分離去除的目的。

通過這個辦法處理后，最終能鑒定到的蛋白也是比較多的，從鑒定的數量上看，與安捷倫的特異性試劑盒差不多。但如果要發高分的文章，用這種方法容易受到質疑，也是因為它的特異性不強，去高豐度有一定的隨機性，高分雜志不太接受這種隨機的方法。但如果樣品體積特別大，可以先試著用Proteominer做一次，接下來再使用一些特異性的去高豐度蛋白的方法。或者您的樣品沒有特異性抗體柱可以用的話，也可以考慮這種方法。

04，基于IgY多克隆抗體蛋白去除產品（Seppro）

該類產品以抗人血漿HAP的IgY組合抗體為配基，與HAP的親和力更強，可去除樣品中占其整個蛋白質組97% 的14種、20 種甚至50種高豐度蛋白質，去除效率>95%，產品形式多樣，包括離心柱、色譜柱、個性定制等，可重復利用。

05，其他方法

有機溶劑沉淀法以及超濾離心法，是運用分子量進行選擇，去除掉樣本中部分大分子高豐度蛋白。該方法操作相對簡便，成本也比較低廉，并且該方法沒有物種的限制性，基本上的物種都可以嘗試。不過，這種方法相對比較簡單，去除高豐度蛋白質的效果并不是非常理想，同時某些種類低豐度蛋白質丟失也比較嚴重。目前，該方法在人、大、小鼠等模式生物的研究中已經很少應用。

小鹿推薦

以上方法是最常用的高豐度去除方法，對于方法的不同以及物種的限制，所去除的高豐度蛋白種類以及效果也各不相同，每種產品能夠去除的高豐度蛋白質種類有差異，相應的成本也有所有不同，希望各位”看官“根據自己的研究需求、經費預算以及物種去選擇合適的方法喲~

文末看點｜lumingbio
鹿明生物從事蛋白組及代謝組質譜檢測業務的專業質譜組學服務公司。以“鹿明質譜”服務品牌，提供全面的創新多組學技術服務。