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蛋白質組學中常用質譜儀匯總(二)

瀏覽次數:663 發布日期:2023-3-7  來源:百泰派克生物科技-原創

質譜分析中分離離子的常見的質譜儀有六種:四極質譜儀、飛行時間質譜儀、扇形磁質譜儀、靜電質譜儀、四極離子阱質譜儀、離子回旋共振。上期文章中,我們介紹了四極質譜儀和飛行時間質譜儀,本期將介紹其他四種常用質譜儀。

扇形磁質譜儀

與前面提到的飛行時間(TOF)質譜儀類似,在扇形磁質譜儀中,離子通過飛行管加速,在飛行管中,離子通過電荷質量比分離。扇形磁場和飛行時間的區別在于用磁場分離離子。當移動電荷進入磁場時,電荷在垂直于外加磁場的方向上偏轉成一個獨特半徑的圓周運動。磁場中的離子經歷兩個相等的力:磁場力和向心力。

公式(4)

公式(4)

然后,可以重新排列上述方程式,得出:

公式(5)

公式(5)

如果將此方程代入動能方程:,可得:

公式(6)

公式(6)

公式(7)

公式(7)

一般來說,一定的m/z值的離子會有一個唯一的半徑路徑,如果磁場大小B和加速區的電壓差V都保持不變,則可以確定路徑半徑。當相似的離子通過磁場時,它們會發生相同程度的偏轉,并遵循相同的軌跡。未經V和B值選擇的離子,將與飛行管壁的任意一側發生碰撞,或不會通過狹縫進入探測器。扇形磁質譜儀可用于質量聚焦,它們可聚焦角色散 (angular dispersions)。

扇形靜電質譜儀

與飛行時間質譜類似,它在飛行中分離離子,但它是用電場分離的。扇形靜電質譜儀由兩個等電位和對電位的曲板組成。當離子穿過電場時,會發生偏轉,電場對離子的作用力等于對離子的向心力。這時,相同動能的離子被聚焦,不同動能的離子被分散。

KE

KE

公式(9)

公式(9)

扇形靜電質譜儀是能量聚焦器,離子束聚焦于此獲取能量。單獨使用的靜電質譜儀和扇形磁質譜儀是單聚焦儀器,當這兩種技術同時使用時,則被稱為雙聚焦儀器,因為在這種儀器中,能量和角色散都被聚焦。

四極離子阱質譜儀

該質譜儀采用了與上述四極質譜儀相似的原理,它用電場以質量電荷比分離離子。該質譜儀由一個特定電壓的環形電極和接地端蓋電極組成,離子通過一個端蓋進入電極之間的區域。進入后,由于電極的作用,空腔中的電場使具有一定m/z值的離子在空間中運動。隨著射頻電壓的增加,較重的質量離子軌道變得更穩定,較輕的質量離子變得不穩定,導致它們與壁碰撞,去除了移動到探測器并被探測器探測到的可能性。

四極離子阱通常進行質量選擇性噴射,通過逐漸增加外加的射頻電壓,有選擇地噴射被捕獲的離子,以增加質量。

離子回旋共振

ICR是一種利用磁場將離子捕獲到其內部軌道的離子阱。在這個分析儀中,不發生離子分離,而是所有特定范圍的離子都被困在里面,另外外加電場還有助于產生信號。如前所述,當一個移動的電荷進入磁場時,它會經歷一個向心力使離子繞軌道運動。同樣的,磁場對離子的作用力等于對離子的向心力。

公式(10)

公式(10)

離子垂直于磁場的角速度可以用Wc=v/r來代替:

公式(11)

公式(11)

公式(13)

公式(13)

軌道的頻率取決于離子的電荷和質量,而不是速度。當磁場保持恒定時,可以通過測量角速度wc來確定各離子的荷質比,其關系是:在高wc時,m/z值較低;在低wc時,m/z值較高。相反符號的電荷具有相同的角速度,唯一的區別是它們的軌道方向相反。

離子回旋共振

離子回旋共振

為了從捕獲的離子中產生電信號,在離子阱上施加一個不同的電場:

公式(13)

公式(13)

當電場中的wc與某一離子的wc相匹配時,離子吸收能量,使離子的速度和軌道半徑增大。在這個高能軌道上,當離子在兩個極板之間振蕩時,電子在其中的一個極板上積聚,從而產生振蕩電流或電流圖像。在一定頻率下,電流與電池中離子的數量成正比。

在傅里葉變換ICR中,細胞內的所有離子同時被激發,使得當前圖像與所有單個離子頻率的圖像耦合。用傅里葉變換對求和信號進行微分以產生所需的結果。

本文由百泰派克生物科技整理編輯。

百泰派克生物科技專注于蛋白質理化性質分析及結構解析、以質譜技術為基礎的蛋白質組學代謝組學技術,致力于建立國際領先的蛋白質研究分析技術平臺,為各科研院所和大學提供高效、準確、性價比高的蛋白質(組)研究技術。

百泰派克技術平臺

檢測分析平臺:多臺高分辨率質譜儀、高效液相色譜、氣相色譜,NMR。

蛋白質組分析平臺:Label-free、iTRAQ、SILAC、SWATH、MRM;蛋白質定性定量鑒定、蛋白質差異分析、發現疾病標記物、發現藥物靶標。

代謝組分析平臺:靶向代謝組學、非靶向代謝組學、脂質組學分析;通量達1000種代謝分子、代謝通路分析、代謝靶標鑒定。流式細胞多因子檢測平臺:CBA、FlowCytomix;微量樣品需求,分析多種細胞因子。

蛋白質從頭測序平臺:Obitrap Fusion Lumos質譜儀、PEAKS軟件分析;100%序列測定,精準蛋白、抗體測序。

生物制藥分析平臺:生物藥物鑒定、變異性分析、純度分析。

流式細胞多因子檢測平臺:CBA、FlowCytomix;微量樣品需求,分析多種細胞因子。

 

發布者:北京百泰派克生物科技有限公司
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