著有 “玄學” 之稱的分子生物學，師兄師姐說小 M 要做的都是 “升級打怪入門級” 的實驗，然而，實驗記錄本上清晰地羅列著自己整理的堪稱完美的 (假裝看懂的 Steps) 實驗流程，可是完美的流程下，總是充斥著不絲滑的操作——
提 DNA，PCR，電泳，純化回收，構載體；提 RNA，反轉錄，文庫構建，qPCR……如何快速完成一套絕美的逆襲！！！

完美操作第一步

打好科研“地基”，從核酸提取開始

 

核酸是遺傳信息的攜帶者，是基因表達的物質基礎，是分子生物學研究的主要對象。如果要對核酸的結構和功能進行研究，首先就要對核酸進行提取和純化。

 

核酸提取是個啥？字面意思，就是把核酸從樣本中提取出來唄！

那一般常見的提取方法有哪些呢？

 

表 1.核酸提取的常見方法

• 提取步驟

核酸提取主要包括細胞裂解、核酸吸附、雜質漂洗和核酸洗脫四步。
那具體到實驗中，我們該選擇哪種提取方法呢？這就要看個人的實驗設計方案及實驗組的經費情況啦！
磁珠法提取效果當然很好，但貴是真的貴，而且還得購買配套的磁力架，批量提取的話，還是不太建議的！自配試劑的優缺點是顯而易見的，若后續實驗對核酸要求不高 (如常規的 DNA 提取，后續用做普通 PCR 擴增)，這種提取方法也可選擇。

但如果對核酸的質量要求比較高 (如定量或文庫構建等。尤其不能忽略的是 RNA 提取中的降解和純度問題)，小 M 還是比較推薦受眾度較高的離心柱法；至于質粒提取，考慮到純度與濃度，肯定也選擇這種性價比較高的離心柱法啦！  
 
 
來來來，排隊隊，順帶開啟 Kits 介紹模式……

 

MCE 新推出三款核酸提取純化試劑盒，均利用硅膠膜離心柱對核酸進行特異性吸附，改良的裂解液可以促進細胞充分裂解、蛋白變性、核酸釋放；改良的吸附緩沖液能有效地促進核酸結合到硅膠膜上；最后經過洗脫即可獲得高純度核酸。
 

Kit one (基因組 DNA 小量抽提試劑盒)：我適用于從動物組織/細胞、酵母、大腸桿菌等樣本中有效提取并純化基因組 DNA，內含 蛋白酶 K 可去除蛋白污染，經純化的基因組 DNA 后續可用于 PCR、qPCR、酶切、Southern Blot 等實驗。

 
Kit two (病毒 DNA/RNA 抽提試劑盒)：我適用于從血漿、血清、全血、組織勻漿液、痰液、動物細胞上清等中提取病毒 DNA/RNA。我不僅包含 蛋白酶 K，更有核酸助沉劑助力，提取的核酸那可不團團來嘛！純化的病毒 DNA/RNA 可用于 PCR、RT-PCR、qPCR 等實驗。
 
Kit three (質粒大量抽提試劑盒)：我適用于從 ≤500 mL LB 培養基培養的大腸桿菌細胞中高效的提取質粒 DNA。RNase A 可對 RNA 進行清除，柱上去除內毒素，Very good!
 
MCE 新上線核酸提取試劑盒 (離心柱型)，嘗鮮試用裝，抓緊時間領取吧！

 

產品名稱	免費試用裝鏈接
Genomic DNA Mini Purification Kit	Free Sample
Viral DNA/RNA Mini Purification Kit	Free Sample
Plasmid DNA Maxi Purification Kit	Free Sample

完美操作第二步

避開操作“雷區”，拿到高純度核酸

 

 小M：Protocol 很完美，實際操作過程中，也難免會遇到各種小問題。

 

---

 

下面小 M 對 RNA 提取過程中常見問題進行了一一盤點。

(此處主要針對 RNA 提取，文末彩蛋有 DNA 和質粒提取注意事項匯總哦)。
 
 
RNA 提取后續試驗主要包括 PCR、RT-PCR、qPCR、cDNA 文庫構建等，RNA 沒提好，后面的實驗問題也是連貫性的，一個不小心可就都 game over 了。這個 RNA 提取，真的是……腦殼疼！
 

來來來，這道題，我們重點講一下。

 

 

 
 
影響 RNA 得率低的因素很多？
抽提 RNA，當然要做到 “三從四德”。
 
一從：外源酶污染？NO！
二從：內源酶活性？NO！
三從：抽提目的性？YES！
 
一德：使用無 RNase 耗材，選擇合適的操作環境。
二德：確定樣本后選擇合適的裂解液，樣本與裂解程度不匹配，抽提結果也會大打折扣。
三德：裂解、勻漿、抽提、洗脫——快！準！狠！
四德：衡量抽提性價比的標準是后續實驗的結果，得率不是唯一標準。即我們需要明確下一步的實驗，如果是 PCR，其實驗本身對 RNA 的質量要求沒有那么高，而 qPCR 對 RNA 的要求相對又高點，但如果要做 cDNA 文庫構建，其對 RNA 的要求就很高了，因此 RNA 質量便是 “經濟基礎” 了，頗有 “一損俱損” 的感覺了。
 
 小白: “三從四德” 我也懂，但 RNA 得率這么低具體是為什么呢？

 小M：還不是因為 RNA 太嬌貴，放太久會降解，環境不干凈會降解，吹口氣也能降解~

 

 

彩蛋時間到！！!

 
 
 

 

 

相關產品

2× PCR Master Mix (with Dye) 高效、快速的 2× 濃度的即用型預混液（含溴酚藍），含有常規 PCR 反應所需的所有組分（樣品 DNA，引物和水除外）。

2× Fast PCR Master Mix (with Dye) 用于快速 PCR 擴增的 2× 濃度的即用型預混液（含溴酚藍），含有除樣品 DNA、引物和水外的所有 PCR 成分。

2× High-Fidelity PCR Master Mix 新型高保真高效率的即用型 PCR 擴增預混液，適用于高難度長片段的 PCR 擴增實驗。

RT Master Mix for qPCR II 采用升級款反轉錄酶，反應更高效、快速，適用于高 GC 含量、復雜二級結構、少量 RNA 模板等。即用型預混液，一步操作即可完成反轉錄反應，簡便、快捷。

RT Master Mix for qPCR II (gDNA digester plus) 反轉錄即用型預混液，采用升級款反轉錄酶，反應更高效、快速，適用于高 GC 含量、復雜二級結構、少量 RNA 模板等。試劑盒配有 gDNA digester 可去除 RNA 模板中的基因組 DNA 污染。

SYBR Green qPCR Master Mix 2× 濃度的即用型預混液，含有 qPCR 的所有組分，只需加入樣品 DNA，引物和水即可快速高效完成 qPCR 反應。

MCE SYBR Green qPCR Master Mix (Universal) 適用于所有 qPCR 儀的 2× 濃度即用型預混液。采用新型抗體法熱啟動 DNA 聚合酶，配合 PCR 反應促進因子及比例優化的 Buffer 體系，實現高特異性、高靈敏度的 qPCR 檢測。

SYBR Green qPCR Master Mix (High/ Low/No ROX) 2× 濃度的即用型預混液，含有 qPCR 的所有組分， 只需加入樣品 DNA，引物和水即可快速高效完成 qPCR 反應。

MCE 的所有產品僅用作科學研究或藥證申報，我們不為任何個人用途提供產品和服務