細(xì)胞轉(zhuǎn)染是將外來核酸RNA或DNA 等小分子物質(zhì)轉(zhuǎn)移到健康細(xì)胞中以產(chǎn)生“轉(zhuǎn)基因細(xì)胞”的過程。 在轉(zhuǎn)染過程中，外源核酸鏈進(jìn)入健康細(xì)胞后，核酸與細(xì)胞中現(xiàn)有的 DNA 結(jié)合，形成一個轉(zhuǎn)基因細(xì)胞。細(xì)胞轉(zhuǎn)染過程中如何提高轉(zhuǎn)染效率，轉(zhuǎn)染效率的影響因素有哪些。

細(xì)胞轉(zhuǎn)染的主要方法是什么？
細(xì)胞轉(zhuǎn)染主要分為兩大類，即：穩(wěn)定轉(zhuǎn)染和瞬時轉(zhuǎn)染。

穩(wěn)定轉(zhuǎn)染是將外源核酸繞過細(xì)胞膜，進(jìn)入細(xì)胞，并通過核膜傳遞從而使外源核酸與宿主 DNA（或 RNA）整合以產(chǎn)生修飾基因。這種轉(zhuǎn)染方式所培育的細(xì)胞后代都將整合這種修飾基因，主要應(yīng)用領(lǐng)域?yàn)椋核幬锖Y選、研究形態(tài)變化、抗生素耐藥性等。
瞬時轉(zhuǎn)染是將外源核酸繞過細(xì)胞膜進(jìn)入細(xì)胞，并且（如果是 DNA）通過核膜傳遞。與穩(wěn)定轉(zhuǎn)染的區(qū)別是：外源 DNA 不會整合到宿主 DNA 中，而是通過蛋白質(zhì)生產(chǎn)繼續(xù)表達(dá)自己。

瞬時轉(zhuǎn)染方式的主要特點(diǎn)是：外源 DNA 不會傳遞給未來的細(xì)胞后代，所以環(huán)境因素改改變或細(xì)胞分裂產(chǎn)生都將終止表達(dá)。瞬時轉(zhuǎn)染有助于了解基因沉默、抑制性 RNA 和小規(guī)模蛋白質(zhì)生產(chǎn)。
至于，實(shí)驗(yàn)中選擇哪種轉(zhuǎn)染方法，其實(shí)主要取決于兩個因素：你的研究方向和正在使用的細(xì)胞區(qū)別。
細(xì)胞轉(zhuǎn)染過程：
細(xì)胞轉(zhuǎn)染按細(xì)胞轉(zhuǎn)染過程的不同可以分為以下幾種：
生物轉(zhuǎn)染：通常被稱為轉(zhuǎn)導(dǎo)，方法是通過病毒感染方式將 DNA 整合到宿主細(xì)胞核中進(jìn)行復(fù)制。也是醫(yī)學(xué)研究的常用方法。
化學(xué)轉(zhuǎn)染：化學(xué)轉(zhuǎn)染法是通過陽離子聚合物和脂質(zhì)體將核酸鏈帶入細(xì)胞。通過使細(xì)胞帶負(fù)電和聚合物帶正電，這兩者被吸引，最終核酸沉積在細(xì)胞中的細(xì)胞轉(zhuǎn)染方法。
物理轉(zhuǎn)染：物理轉(zhuǎn)染法是基于電流、激光的轉(zhuǎn)染方法。比如：通過電轉(zhuǎn)儀實(shí)現(xiàn)轉(zhuǎn)染或者通過光轉(zhuǎn)染的方式，使激光束會在特定的亞細(xì)胞位置產(chǎn)生孔洞，來傳遞外源核酸。

決定細(xì)胞轉(zhuǎn)染效率的因素有哪些？
決定細(xì)胞轉(zhuǎn)染效率主要的幾個因素：
1. 細(xì)胞群的生長態(tài)勢與細(xì)胞活力：-在創(chuàng)建細(xì)胞分析的過程中，細(xì)胞活力往往具有決定性的作用。如果沒有健康的細(xì)胞群，那么轉(zhuǎn)染效率也相對低下，甚至還會得到不正確和誤導(dǎo)性的結(jié)果。
2.細(xì)胞融合度：細(xì)胞的融合度衡量細(xì)胞在給定表面上的堆積程度（不要與細(xì)胞密度混淆）。50% 的細(xì)胞匯合意味著一半的表面被覆蓋。融合過少或過多都會影響細(xì)胞對轉(zhuǎn)染的接受程度。
3.細(xì)胞類型：不同類型的細(xì)胞具有不同的壽命、細(xì)胞壁特征及功能。比如部分細(xì)胞容易進(jìn)行轉(zhuǎn)染，而有些細(xì)胞則本身就難以轉(zhuǎn)染，所以轉(zhuǎn)染效率也會存在差異。
4.轉(zhuǎn)染的核酸類型：不同核酸的復(fù)雜程度也不相同。比如：DNA的結(jié)構(gòu) 比 RNA 復(fù)雜，而 RNA 比某些單獨(dú)的核酸鏈更復(fù)雜。一般來說，核酸復(fù)雜的，轉(zhuǎn)染過程相對困難，轉(zhuǎn)染效率相應(yīng)也較低。
5.轉(zhuǎn)染方法：使用不同的轉(zhuǎn)染方法，所獲得的細(xì)胞轉(zhuǎn)染效率也是不一樣的。



如何提高轉(zhuǎn)染效率？
在不同的轉(zhuǎn)染過程（生物、化學(xué)、物理）中，隨著技術(shù)和工藝不斷改進(jìn)，轉(zhuǎn)染效率也在不斷提升。例如，光學(xué)技術(shù)和激光精度的每一次進(jìn)步都會對光轉(zhuǎn)染產(chǎn)生有利的影響。
但在此之前，提高細(xì)胞轉(zhuǎn)染效率的方法主要有：
1. 培養(yǎng)健康的活力指數(shù)高的健康細(xì)胞群。細(xì)胞分選儀可以降低細(xì)胞分選時高電壓對細(xì)胞的刺激，是輔助培養(yǎng)健康細(xì)胞群的重要工具。
2. 優(yōu)化核酸，保證有效的核酸純度。 細(xì)胞轉(zhuǎn)染過程中需要確保所引入細(xì)胞的 DNA 和 RNA 盡可能接近同質(zhì)。否則，分析結(jié)果時變量太多，轉(zhuǎn)染效率會因不同類型的基因進(jìn)入細(xì)胞而變得混亂。轉(zhuǎn)染前，可以制備不同濃度核酸來用于細(xì)胞檢測的測試。例如，通過逐步制備 25-250 ng 的核酸濃度以針對實(shí)驗(yàn)的細(xì)胞群進(jìn)行測試，從而篩選出合適的轉(zhuǎn)染濃度從而提升轉(zhuǎn)染效率。
3.實(shí)時校正每個孔的細(xì)胞群，使每個孔內(nèi)的細(xì)胞群盡量保持適宜的密度。
當(dāng)細(xì)胞大量聚集在一個孔中時，由于細(xì)胞接觸面會受到抑制，容易造成低轉(zhuǎn)染率。正常情況下，細(xì)胞的匯合度在大約 60-80%之間，轉(zhuǎn)染效率較高。

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