首先我們要知道,濁度法又叫比濁法,是一種用鱟試劑與內毒素反應過程中的濁度變化而測定內毒素含量的方法。那濁度法到底是怎么利用鱟試劑進行內毒素檢測的呢?
首先需要將鱟試劑與反應混合物進行配比,通過與細菌內毒素的作用反應后,試管內部會產生堅硬的凝膠,而凝膠則會將液體變得渾濁起來,這時候根據鱟試劑和細菌內毒素的反應可以知道,在內毒素濃度在20~100pg的條件下,試管的濁度程度是和細菌內毒素呈線性關系的。根據這個試驗可以知道,濁度法在試驗中可以大大減少鱟試劑的使用量,而且整個操作過程是非?焖、高效的,整個試驗操作過程也非常便捷,因為儀器的半自動化,試驗人員可以非常容易上手。
在這個試驗過程中,整個過程必須把握精準度,對鱟試劑的稀釋比例一定要了解清楚,樣品也要小心翼翼處理,避免進一步污染,然后各取0.1ml加入微孔板中,放入震顫儀中振動60秒鐘,這個過程能充分將鱟試劑和樣品充分均勻混合。接著在37攝氏度放入環境下靜置一小時,然后使用使用光度計在360~380nm處讀取試驗樣品的光密度值。這里還需將稀釋過的細菌內毒素的一系列批次進行陽性對照,然后將光密度值和細菌內毒素的含量繪制呈標準曲線,這樣就能準確知道試驗樣品的細菌內毒素含量。
整個操作過程,時間的把控是非常重要的,時間越長,濁度變化越明顯,正常情況下,靜置一小時即可。假如是在室溫的情況下,如果靜置長時間的話,試驗樣品的濁度程度也會有所增強,所以靜置結束后,一定要馬上讀取該試驗樣品的光密度值,而且還應該每分鐘讀取一次,重復四次進行,再選取它們的平均值,這樣細菌內毒素的含量才能準備,但是要知道這里的變異系數是不能超過1%的。
以上就是濁度法利用鱟試劑進行細菌內毒素檢測的方法,大家在檢測時一定要把握好細節,試驗結果才能更準確。