微透析技術是一種新的生物樣品取樣技術，具有實時、活體、原位、樣品分析無需前處理等優點。近年來多用于靶向分布和體內代謝等方面的研究，尤其是治療腦部疾病的藥物研究，為評價藥物的血腦屏障穿透性及新型藥物的體內藥動學提供重要依據。

原兒茶醛是天麻、烏蕨及丹參等中藥的有效成分之一，可通過抗炎和神經保護等作用機制來發揮抗大鼠腦缺血/再灌注損傷的藥理作用。本研究擬對原兒茶醛腦微透析探針的體內外回收率進行考察，以期為今后研究大鼠CIRI 模型的腦組織藥代動力學特征提供參考。

1、動物腦微透析導管植入手術探針預處理：將探針置于肝素鈉溶液中，提前用超純水以1.0μl/min 的流速灌流沖洗20 min，洗脫新探針半透膜上封膜的甘油。

2、導管植入術：正常大鼠6 只，大鼠吸入2% 異氟烷麻醉后，固定俯臥在腦立體定位儀上，剃除大鼠頭部被毛，剪開頭皮后用雙氧水去除肌肉組織充分暴露頭骨。按大鼠腦圖譜，以前囟作為定位基點，并根據坐標（AP：+3.2 mm；ML：+0.4 mm；DV：3.0 mm）標記右側大腦皮層區，將帶管心針的引導管綁在腦立體定位儀垂直臂上，定位準確后用顱鉆鉆孔并刺破硬腦膜。同時以此點作為參照在周圍顱骨上繼續鉆2 個小孔，植入2 枚小螺釘，使3 孔連線成1個三角形保證套管穩定。引導管浸于5% 肝素鈉溶液中，插入硬腦膜的腹側垂直定位點，用牙科水泥固定并縫合創口。

3、干預方法：正常大鼠頭部銜接微透析，采用取樣時的流速灌流平衡1 h，通過股靜脈注射原兒茶醛（100mg/kg），給藥體積為0.5 ml/100g。

4、原兒茶醛腦微探針體外回收率的測定

探針回收率可用正、反透析法來測定。其中正透析法可以說明探針的真實回收率，反透析法則可顯示體內回收率與真實回收率的統一性。研究選擇正透析和反透析2 種實驗方法來探究流速、濃度和探針穩定性對大鼠腦微透析探針體內外回收率的影響。

 

結果

1.流速對原兒茶醛體內外回收率的影響體外實驗結果表明，同一濃度的灌流液，原兒茶醛回收率隨著流速的增加而降低。體內實驗結果表明，隨著流速的增加，原兒茶醛體內回收率降低。在不同流速（1.0、1.5、2.0、2.5、3.0 μl/min）下，體內探針回收率略低于體外回收率。見圖1。
  2. 濃度對原兒茶醛體內外回收率的影響體外實驗結果表明，在3.13~25 μg/ml 藥物濃度范圍內，探針回收率基本無明顯變化，且回收率未呈現濃度依賴性，證實藥物濃度與探針的回收率無關，能夠應用微透析法考察大鼠腦組織中原兒茶醛的實際濃度，見圖2 A。體內實驗結果表明，原兒茶醛濃度在3.133~25 μg/ml 內對探針回收率影響極小，檢測到的回收率可校對不同濃度的透析液，得出大鼠腦組織中原兒茶醛的實際濃度，見圖2 B。在不同濃度范圍內，體內外探針回收率無明顯差異，見圖2 C。
 

3.原兒茶醛體內外回收率穩定性的考察體外實驗顯示，設置流速為 1.5μl/min 時，探針的體外回收率PR=22.4%,RSD=6.54%;RR=19.5%,RSD=8.30%,證實探針在體外8 h 內的回收率穩定性較好。體內實驗結果顯示，腦探針的體內回收率=31.8%，RSD=6.19%，證明原兒茶醛體內腦探針8 h內回收率基本維持平穩，具有良好的穩定性。且體內外探針回收率在8h內基本保持一致。見圖3。

 

結果顯示，隨著灌流液流速提高，原兒茶醛腦微透析探針回收率逐漸降低，原兒茶醛質量濃度不會影響腦微透析探針回收率，且8 h 內原兒茶醛腦微透析探針回收率基本保持穩定。微透析取樣時，流速越快，半透膜兩側物質交換的效率越高，單位時間內收集的樣品體積越多，但回收率越低；相反，流速越慢則回收率越高，但樣品體積會減少。

 

本研究表明正、反透析法測得的原兒茶醛大鼠腦探針體外回收率基本相同，并且體外和體內透析法的相對回收率亦基本相同。本研究建立的原兒茶醛腦微透析方法，可為后期藥動學及開發缺血性腦卒中的候選藥物研究提供實驗指導。

 

文獻來源：孫航，楊瓊英，寧瓏等.原兒茶醛腦微透析探針的體內外回收率研究[R].上海中醫藥大學學報.2022.

 

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