為了進一步降本增效，越來越多的藥企使用N-1代次的種子在N罐中提前培養的工藝。本文介紹了用百林科的一次性生物工藝技術進行小體積培養的工藝設定，并與傳統梯次培養相比較的優勢，提供了靈活性更高的工藝方案選擇。
 
  
百林科CytoLinX WB 一次性波浪式生物反應器和CytoLinX BR 50-2000L系列一次性罐體式生物反應器，均可實現無級放大生產，為優化工藝提供了強大的一次性設備解決方案。
 
  
設備優點   
CytoLinX WB 一次性波浪式生物反應器特點包括：
► 培養體積從0.1 L 到100 L
► 軟件界面友好且穩定，符合 21 CFR Part 11 要求
► 可選的 pH, DO 模塊
► 使用氣體質量流量計 (MFC) 對氣體進行精準計量
► 耗材款式多樣，包括基礎款，pH & DO 電極款，灌流款
► 涵蓋針對細胞治療應用的耗材設計
     
CytoLinX BR 一次性罐體式生物反應器特點包括：
► 反應器的培養體積從50 L到2000 L
► 界面用戶友好，可實現 “即插即用” 的 “1 控多” 功能
► 采用穩定的 DCS 控制系統，符合 ISA 88 控制標準
► 軟件設計符合 21 CFR Part 11
► 耗材底通大泡，中泡，微泡可選，符合多種工藝需求
 
本應用使用CytoLinX BR 一次性罐體式生物反應器和CytoLinX WB 一次性波浪式生物反應器進行優化抗體生產的Fed-Batch工藝中的效果。本次實驗分別使用CHO-K1,CHO-DG44細胞，通過在CytoLinX WB 一次性波浪式生物反應器進行細胞擴增，隨后轉接到200L CytoLinX BR 一次性罐體式生物反應器中培養。兩次實驗的抗體產量均達到預期。

下圖為CytoLinX BR一次性罐體式生物反應器在細胞培養過程中表現出極佳的工藝參數的控制效果。
   
 
實驗方法
 
本次實驗分別使用CHO-DG44，CHO-K1細胞，細胞根據標準方法從凍存管中復蘇，然后每三到四天在搖瓶中進行傳代擴增。待細胞量足夠后，將細胞接入CytoLinX WB 及 CytoLinX BR-200生物反應器繼續培養。
     
 
實驗一：CHO-DG44 細胞擴增、N-1擴增階段及流加培養階段操作參數和條件
  實驗一結果: 細胞培養生長曲線和生化數據如圖 2、圖 3 所示。
    
  
實驗二：CHO-K1 細胞擴增、N-1擴增階段及流加培養階段操作參數和條件
   
CytoLinX-200起始培養體積為140 L 。經過每天補料，在收獲時的CytoLinX-200最終體積約為175 L。如圖2、圖4所示，兩種生物反應器培養的細胞顯示出非常相似的生長曲線，具有三個截然不同的生長階段：在剛開始72小時內為初始的快速生長階段；然后是一個較慢的生長階段；而后是平臺期為細胞活力不斷降低的死亡階段，直到收獲。細胞在具有93.62%到93.1%的活力時被收獲。兩次培養均達到與預期相匹配的效果。
 
如圖3、圖5所示 兩次實驗pCO2有相同的上升趨勢。培養過程，二氧化碳分壓(pCO2)曲線如圖所示。在培養的早期階段，細胞產生乳糖，降低pCO2以維持pH，相反隨著乳糖濃度的降低和補料操作增加鹽和堿濃度，二氧化碳分壓將增加。
 
 
結論
結果表明，CytoLinX BR 50-2000一次性罐體式生物反應器既可以用于種子培養，也可以用于規模化生產。兩批次反應器培養細胞結果表現出與衛星罐相似的細胞密度和活力、代謝物濃度和抗體產率。在連續兩次實驗中, CytoLinX BR均表現出相當穩定的工藝控制效果與高效的蛋白表達結果，符合客戶生產預期。CytoLinX BR系列生物反應器，在細胞培養方面表現出極佳的工藝參數穩定控制的效果，為重組蛋白及抗體放大及生產提供了一個可靠的、高效的解決方案。