重組蛋白的表達步驟和重點選擇標準
：我要買 Human EGF 用于體外細胞培養，網上一查，好多種相似產品，我該如何選擇？
：重組蛋白選擇，有幾個重點選擇標準，我給你們列出來了！
圖 1. 重組蛋白表達步驟
在選擇產品前，明確實驗目的，可排除一些干擾因素。
圖 2. 重組蛋白表達體系的選擇和對比
選擇因素 2：產品特性
活性數據 (Biological Activity)
ED50 半數有效量 (Median effective dose, ED50) 在量反應中指能引起 50% 最大反應強度的藥量，在質反應中指引起 50% 實驗對象出現陽性反應時的藥量。一般是通過其在標準化條件下對特定細胞類型的影響 (例如刺激細胞增殖) 來測量的。
小貼士：如何將 ED50 轉換為比活力單位？
: 如下圖中，通過Human EGF 劑量依賴性刺激小鼠 BALB/c 3T3細胞增殖，ED50 <0.2 ng/mL。
一個活性單位是每毫升具有最大響應作用 50% 的細胞因子的數量：
Human EGF 1 個 unit (1U) 就是 0.2 ng/mL，每 1 mg 的 Human EGF 的活力值 (unit) 為:
即 Human EGF 的比活力為 5.0 × 106 units/mg。
計算當然也是有捷徑的：
進入公眾號 “MCE 抑制劑”-重組蛋白復溶計算器-比活力計算器
Part 2：老生常談—重組蛋白復溶及保存
：由于工藝原因，蛋白凍干粉產品會呈現粉末狀或肉眼不易觀察到的透明薄膜狀、膠凍狀、雪花狀，這些都是正�，F象。凍干的體積大小也會受凍干前緩沖液組分、鹽離子濃度、產品濃度等影響。此外，在運輸過程中，凍干顆�？赡軙稚�，并粘附于瓶壁和瓶蓋。MCE 保證每管產品的蛋白總量達到標示含量。說到這里，講講怎么更好地溶解重組蛋白吧~
第一步：開蓋前需離心
在開蓋使用之前，需先離心，將凍干粉收集于管底。實驗操作: 10,000-12,000 rpm 離心 30 s，若沒有高速離心機，3000-3500 rpm，離心 5 mins。第二步：產品復溶
還是以 Human EGF 為案例；10 μg 規格溶解
敲黑板：無論長期實驗還是短期實驗，溶解的濃度不低于 100 μg/mL！！
短期實驗：使用復溶 Buffer 直接溶解的重組蛋白，液體可在 2-8℃ 最長保存 1 周。對于周期較短的實驗 (不超過 7 天)，可以直接取該條件下保存的細胞因子或者重組蛋白溶液加入到培養體系內即可，一周之內用完。
(復溶 Buffer: 可參考重組蛋白使用指南里建議的溶液或者使用已貼心搭配好的蛋白伴侶）
長期實驗：以下步驟供參考：
1、先加 20-30 μL 建議復溶液
2、再加 70-80 μL 含載體蛋白 (0.1% BSA, 5% HAS, 10% FBS, 或 5% 海藻糖) 的緩沖液/培養基
3、分裝大于 20 μL/管第三步：產品保存
用復溶 Buffer 重懸的蛋白溶液用含載體蛋白 (0.1% BSA, 5% HAS, 10% FBS, 5% 海藻糖) 的溶液稀釋后，-20℃ 可保存至少三個月。Part 3：產品細節篇
：以下一些小細節也要注意。
1、溶解過程中不要采用渦旋震蕩輔助溶解
上期給大家說到：化合物的溶解可以借助水浴、超聲、渦旋、震蕩等方法助溶。但對于重組蛋白來說，具備一定的空間結構會使其活性更佳。
正確操作：移液器槍頭輕輕吹打混勻或者上下顛倒混勻。若無法做到充分溶解，可以將復溶產品至于水平搖床低速搖一段時間或 4℃ 靜置 2 h 以上。
2、稀釋用的含載體蛋白的溶液選擇
特別注意的是，稀釋用的含載體蛋白的溶液是指有一定緩沖能力、pH 值為中性的溶液，如 PBS、培養液 DMEM 或者 RPMI1640 等。不可直接用水來代替。
3、不同重組蛋白之間是否可以交叉使用？
重組蛋白的種屬交叉活性需要根據具體產品而定；建議盡量選擇對應種屬。如實在無法匹配種屬：
a . 大多數人細胞因子對小鼠細胞有效 (僅少數例外)。
b. 干擾素，GM-CSF，IL-3，IL-4 具有種屬特異性，例如重組人的這些細胞因子只能作用于人細胞，對小鼠和大鼠等其他種屬無效果。
c. 成纖維細胞生長因子 (FGFs)、神經營養素 (Neurotrophins，如 BDNGF/GDNF/CNTF/β-NGF 等)、TGF-β 等高度保守，各種屬間交叉活性強。
d. 同源交叉性的比對：打開蛋白數據庫網站 Uniport，進行數據比對。
以上信息僅供參考，畢竟文獻是最好的老師。
4、有些蛋白帶了標簽，有什么作用？
重組蛋白的融合標簽是在目的蛋白 N 端或 C 端進行融合表達的特定蛋白、多肽或寡肽標簽。常用的標簽有 His、GST、MBP、Trx、TF、MBP、Nus、SUMO、Flag 和 Fc 等。
