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高通量芯片點(diǎn)樣儀應(yīng)用疫苗靶點(diǎn)的快速篩選

瀏覽次數(shù):1766 發(fā)布日期:2022-5-31  來(lái)源:本站 僅供參考,謝絕轉(zhuǎn)載,否則責(zé)任自負(fù)
ArrayJet高通量芯片點(diǎn)樣儀應(yīng)用于疫苗靶點(diǎn)的快速篩選

通過(guò)疫苗接種獲取免疫力,仍然是目前預(yù)防傳染力強(qiáng)、危害嚴(yán)重疾病的有效方式,然而使用傳統(tǒng)方法確定疫苗的抗原靶點(diǎn)耗時(shí)耗力。蛋白質(zhì)芯片是一種有效的替代方法,并且在通量上也具有顯著的優(yōu)勢(shì),不僅可以使研究人員簡(jiǎn)化實(shí)驗(yàn)篩選方案,而且可以加快抗原疫苗靶點(diǎn)的發(fā)現(xiàn)。

來(lái)自牛津大學(xué)的Faith Osier教授,在TED2018年11月演講中“The key to a better malaria vaccine”,講述了Arrayjet芯片點(diǎn)樣儀是如何幫助她的團(tuán)隊(duì)分析了來(lái)自7個(gè)非洲國(guó)家,15個(gè)地區(qū),10000個(gè)人類(lèi)血清樣本,來(lái)識(shí)別針免疫抗體是通過(guò)什么方式來(lái)對(duì)抗瘧疾寄生蟲(chóng)。同年12月,在Frontiers in Immunology發(fā)表如下文章。
 

惡性瘧原蟲(chóng)(Plasmodium falciparum)是瘧疾的主要病原體,其致病手段是通過(guò)裂殖子入侵宿主紅細(xì)胞,并在紅細(xì)胞內(nèi)大量繁殖,而此過(guò)程中表達(dá)的蟲(chóng)體蛋白和分泌的代謝產(chǎn)物成為關(guān)鍵的致病因子.因此惡性瘧原蟲(chóng)的裂殖子蛋白可作為研發(fā)新型抗瘧疫苗的重要靶標(biāo). 

Faith Osier教授的研究團(tuán)隊(duì)利用收集的10000個(gè)人類(lèi)血清樣本, 篩選、合成了128種瘧原蟲(chóng)重組裂殖子蛋白,使用ArrayJet Ultra Marathon 進(jìn)行高通量點(diǎn)樣,每張玻片8064個(gè)點(diǎn),即文章中命名為KILchip芯片,如圖1。

圖1:采用ArrayJet高通量點(diǎn)樣儀在硝化纖維素(NC)載玻片上進(jìn)行蛋白點(diǎn)樣,玻片分為21個(gè)相同的矩陣區(qū)域,每個(gè)矩陣384個(gè)點(diǎn)(3 repeats),重組瘧原蟲(chóng)蛋白111 samples,17 control samples,8064個(gè)點(diǎn)/片,點(diǎn)樣體積400pl,蛋白樣品濃度(250μg/ml),點(diǎn)樣溫度18℃,濕度50%. 

隨后該研究團(tuán)隊(duì),將高密度芯片KILchip 分別和肯尼亞瘧疾病患66個(gè)血清樣本、瑞典健康人的血清樣本,以及抗體進(jìn)行孵育雜交(如圖2),其結(jié)果采用熒光芯片掃描儀進(jìn)行熒光檢測(cè)(如圖3)。 
圖2:蛋白芯片放在抗原抗體反應(yīng)容器中進(jìn)行人血清和抗體孵育(donkey anti-human IgG-Alexafluor 647 ,室溫孵育3小時(shí))
 
圖3左圖:蛋白芯片雜交后熒光芯片掃描儀的結(jié)果分析,篩選出IgG抗體高度結(jié)合的裂殖子相關(guān)蛋白(左圖:肯尼亞瘧疾病患66個(gè)血清樣本, 右圖:瑞典健康人的血清右圖)

通過(guò)對(duì)熒光強(qiáng)度的變化、數(shù)據(jù)對(duì)比和分析,快速、高效地篩選到同瘧疾相關(guān)的瘧原蟲(chóng)重組蛋白,并得到經(jīng)典方法ELSA的驗(yàn)證,為研發(fā)抗瘧疫苗提供新的靶點(diǎn)。 

客戶(hù)評(píng)價(jià)
“英國(guó)ArrayJet公司不僅生產(chǎn)非常出色的芯片點(diǎn)樣儀,而且還擁有優(yōu)秀的專(zhuān)業(yè)技術(shù)團(tuán)隊(duì),可根據(jù)客戶(hù)獨(dú)特的項(xiàng)目需求定制解決方案。高通量和快速的點(diǎn)樣方式吸引我們與Arrayjet進(jìn)行合作。 在微陣列芯片設(shè)計(jì)的每一步,他們提供專(zhuān)業(yè)的應(yīng)用服務(wù),回答我們提出的相關(guān)問(wèn)題。正是在這種出色的支持下,我們研究團(tuán)隊(duì)攜同Arrayjet的芯片點(diǎn)樣儀,完成了諸多相關(guān)科學(xué)研究。”
—Dr James Tuju, Principal Investigator, KEMRI Wellcome Trust, Kenya

原文文章
KILchip v1.0: A novel Plasmodium falciparum merozoite protein microarray to facilitate malaria vaccine candidate prioritization.

G. Kamuyu, J. Tuju, R. Kimathi, K. Mwai, J. Mburu, N. Kibinge, M. Chong Kwan, S. Hawkings, R. Yaa, E. Chepsat, J. M. Njunge, T. Chege, F. Guleid, M. Rosenkranz, C. K. Kariuki, R. Frank, S. M. Kinyanjui, L. M. Murungi, P. Bejon, A. F?rnert, K. K. A. Tetteh, J. G. Beeson, D. J. Conway, K. Marsh, J. C. Rayner and F. H. A. Osier

Frontiers in Immunology

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