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八臂迷宮實驗中常遇到的問題

瀏覽次數:1084 發布日期:2022-5-7  來源:本站 僅供參考,謝絕轉載,否則責任自負

八臂迷宮又稱放射迷宮,是一種評價動物空間記憶的行為學方法。還可以檢測動物的記憶變化,也可以用來篩選相關模型的動物。它是奧爾頓在1978年建立的。其基本依據是實驗動物禁食一段時間,以誘導它們在實驗中的覓食行為,從而驅使它們探索迷宮的懷抱。經過一定時間的訓練,動物可以記住食物在迷宮中的空間位置。這種方法可以同時測量動物的工作記憶和參考記憶。操作簡單可行,經濟實用。它能區分短時工作記憶和長時參考記憶,可用于評價動物的學習記憶功能。

八臂迷宮(Eight-arm maze)用于檢測藥物或腦損傷狀態下學習記憶的表現。它由八個相同的臂從一個中心平臺輻射出來,因此也被稱為放射狀迷宮。八臂迷宮簡單可行,能區分短時工作記憶和長時參考記憶。現在已被廣泛用于評價學習和記憶功能。

實驗室儀器

八臂迷宮,顧名思義,有八個等長的臂,呈放射狀。采用高檔醫用有機板制成,接觸面不反光,形成U型。平臺的末端可以用來放置食物。迷宮中央有一個圓形平臺,與八條手臂相通。每個扶手入口都有一個可控制的活動門。鼠標尺寸:長425mm,寬145mm,高225mm鼠標尺寸:長300mm,寬60mm,高150mm。

VisuTrack動物行為軌跡分析系統(上海欣軟)為用戶提供了多種跟蹤算法:灰度法、背景減法和人工智能算法、穩定可靠的頭、中、尾跟蹤算法,甚至可以識別果蠅幼蟲等微小生物。

檢測方法

  • 方法1:

1)動物適應實驗環境1周后,稱重,禁食24小時。每天訓練后,給大鼠正常飲食(大鼠16-20g,小鼠2-3g,視體重而定),使體重保持在正常飲食大鼠的80%~85%。

2)第二天,將食物顆粒(每粒4~5個,直徑約3 ~ 4mm)撒在迷宮的臂和中心。然后,四只動物同時被放在迷宮的中央(每只手臂的門都被打開)。讓他們自由進食,探索10分鐘。

3)第三天,重復第二天的訓練。這個過程讓動物在沒有強大壓力的情況下熟悉迷宮環境。

4)從第四天開始,對動物進行單獨訓練:靠近外食箱的每只胳膊上各放一只,讓動物自由進食。進食后或10分鐘后將動物取出。

5)第五天,把食物放在食物盒里,每天重復前一天的訓練兩次。

6)第六天后,隨機選取4只手臂,每只手臂放一粒膠囊;關閉每個臂門,將動物放在迷宮的中心;30s后,手臂門打開,讓動物在迷宮中自由活動,并帶走食物顆粒,直到動物吃掉其四只手臂中的所有食物顆粒。如果10分鐘后顆粒仍未被吃掉,實驗終止。每天訓練兩次,間隔1小時以上。

  • 方法二:

1)動物適應實驗,稱重,禁食24小時。每天訓練后,限制性給予正常飲食(大鼠16-20g,小鼠2-3g,視體重而定),使體重保持在正常飲食大鼠的80%-85%。

2)第二天,將食物顆粒(每粒4-5粒,直徑約3-4毫米)撒在迷宮的臂和中心區域。然后,四只動物同時被放在迷宮的中央(每只手臂的門都被打開)。讓他們自由進食,探索10分鐘。

3)第三天,重復第二天的訓練。這個過程讓動物在沒有強大壓力的情況下熟悉迷宮環境。

4)從第四天開始,對動物進行單獨訓練:在靠近外食盒的每只胳膊上放一粒,讓動物自由進食。進食后或10分鐘后將動物取出。

5)第五天,把食物放在食物盒里,每天重復前一天的訓練兩次。

6)第六天后,隨機選取4只手臂,每只手臂放一粒膠囊;關閉每個臂門,將動物放在迷宮的中心;30s后,手臂門打開,讓動物在迷宮中自由活動,并帶走食物顆粒,直到動物吃光四個手臂中的所有食物顆粒。如果10分鐘后顆粒仍未被吃掉,實驗終止。每天訓練兩次,間隔超過1h。
 

  • 方法三:

1)首先,動物適應環境后,每天可以做10分鐘的習慣性訓練。他們可以觸摸所有8只手臂,直到他們在每只手臂末端吃完0.2毫升巧克力牛奶。

2)第二強制階段,每回合先約束初始手臂,然后接觸所有手臂。2分鐘后,打開第一只手臂,然后一次舉起一只手臂,直到第四只手臂。強制階段期間的序列是偽隨機的,但是所有4個分支將顯示為空間順序(例如1、2、3和4)。

3)第三階段是選擇階段。在強制階段之后,所有八個手臂同時張開。在選擇階段,預計動物會訪問剩余的四個臂,重新進入之前訪問過的臂被認為是錯誤的。當老鼠從所有八個手臂取回獎勵并回到中央平臺時,實驗結束,或者總時間超過10分鐘。如果實驗被篩選,當實驗因超過時限而停止時,該動物將從分析中刪除。

4)間隔2分鐘后,開始下一個測試。訓練動物每天在30分鐘內進行6-10次測試,并持續訓練,直到連續5天正確測試(即沒有任何錯誤的測試)的百分比超過50%。
 

  • 需要注意的細節

1.關于手臂遠端的東西的選擇,如果只是平時吃的食物,即使有點餓,動物也沒有很強的動力。你可以用動物喜歡吃的東西來代替,因為這個實驗基本上取決于饑餓或者想吃的驅動力,東西的選擇很關鍵。

2.當使用食物限制時,會有可能引起動物營養不良的問題。所以,即使在限制進食的情況下,動物每周也要增重5g,防止因營養不良而生病。疾病只能排除,不能包含。

3.動物一到一個新的環境,必然會產生恐懼。所以,當動物適應了環境,就讓他適應你,同時,也要適應迷宮。之前已經強調過的,這里不再贅述。保持他一貫的品味和安靜的環境。

4.與水迷宮不同,八臂迷宮適用于重復測試或長時記憶測試。一般來說,工作記憶代表短時記憶,參考記憶代表長時記憶。

5.小鼠的輻射迷宮設備和實驗程序與大鼠相似,但迷宮規格應小于大鼠,以免增加小鼠行為操作的難度。

6.這個實驗只能用來測量工作記憶。這種方法的唯一區別在于,食物顆粒被放置在所有的輻射臂上,而不是僅僅四個臂上。

7.慢性應激可影響動物的迷宮操作,且存在性別差異。慢性應激后,雄性大鼠記憶力減弱,記憶錯誤頻率增加。相反,雄性大鼠的空間記憶增加,錯誤頻率降低。

8.即使在限制進食的情況下,大鼠的體重也要每周增加5g,以防止動物因營養不良而生病。淘汰健康狀況不佳的動物。

9.迷宮周圍的任何東西都可以被動物用作空間的標志。移除或移動這些標志可能會使動物難以操作,并降低迷宮臂選擇的準確性。

10.八臂迷宮實驗方法迷宮中輻射臂的數量可以根據實驗目的而不同,包括8臂、16臂、24臂、32臂、40臂和48臂迷宮。迷宮越少,探索臂越小,動物的行為越簡單。增加臂數一方面增加了對動物空間記憶的要求,另一方面也引入了更多需要考慮的干擾因素(比如過去迷宮學習對當前測量記憶的影響)。所以通常使用8臂輻射迷宮,既可以減少過多臂的不必要干擾,又可以縮短訓練和測試時間。

11.使用的食物通常很小,巧克力味的(動物最喜歡的口味之一)或甜的早餐甜甜圈(每個10毫克);也可以用流質食物(比如巧克力牛奶或者水)。后者特別適用于測試一些影響動物吞咽固體食物的藥物。

12.影響動物迷宮操作的因素主要有兩個:對迷宮或觀察者的恐懼、動物的探究習慣和已知食物被放入迷宮臂的驅動力。過多的恐懼會阻止動物在迷宮中操作,使它們停留在迷宮的某個地方,而不是探索。缺乏對食物的渴望也會產生類似的結果。增加對動物的撫摸,必要時加高迷宮臂的側壁,有助于減少對動物的恐懼。如果食物的驅動作用不足,可以減少食物量,但必須同時監測體重和一般身體狀況。通常,禁食前大鼠體重不應低于80%;對于大多數老鼠來說,體重減輕15%就足夠了。
 

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