八臂迷宮(8-Arm Maze)用來檢測藥物或大腦受損狀態下學習和記憶方面的表現,它由八個完全相同的臂組成,這些臂從一個中央平臺放射出來,所以又被稱為放射迷宮(Radial Maze)。八臂迷宮操作簡便、可行,而且能區分短期的工作記憶和長期的參考記憶,現已被廣泛用于學習記憶功能評價。
1.動物適應實驗環境1周后,稱重,禁食24小時。此后每天訓練結束后限制性地給予正常食料(據體重不同,大鼠16-20g,小鼠2-3g),以使體重保持在正常進食大鼠的80%~85%。
2.第二天,迷宮各臂及中央區分撒著食物顆粒(每只4~5粒,直徑約3~4mm)。然后,同時將4只動物置于迷宮中央(通往各臂的門打開)。讓其自由攝食、探究10min。
3.第三天,重復第二天的訓練。這一過程讓動物在沒有很強的應激條件下熟悉迷宮環境。
4.第四天起,動物單個進行訓練:在每個臂靠近外端食盒處各放一顆食粒,讓動物自由攝食。食粒吃完或10min后將動物取出。
5.第五天,將食物放在食盒內,重復前一天的訓練,一天2次。
6.第六天以后,隨機選4個臂,每個臂放一顆食粒;各臂門關閉,將動物放在迷宮中央;30s后,臂門打開,讓動物在迷宮中自由活動并攝取食粒,直到動物吃完所有4個臂的食粒。如經10min食粒仍未吃完,則實驗終止。每天訓練兩次,其間間隔1h以上。
記錄以下4個指標:1工作記憶錯誤(working memory errors),即在同一次訓練中動物再次進入已經吃過食粒的臂;2參考記憶錯誤(reference memory errors ),即動物進入不曾放過食粒的臂;3總的入臂次數;4測試時間,即動物吃完所有食粒所花的時間。此外,計算機還可記錄動物在放射臂內及中央區的活動情況,包括運動距離和運動時間等。連續5次訓練的工作記憶錯誤為零、參考記憶錯誤不超過1次時,可以開始藥物測試或腦內核團結構毀損實驗。一般先給溶劑(如生理鹽水),再給削弱記憶的藥物(如東~~~~MK-801等),然后加用增強記憶的藥物,劑量由低到高。
應用軟件:VisuTrack動物行為分析軟件
用兩個指標評價動物的記憶,即工作記憶錯誤頻率(frequency of working memory errors) 和參考記憶錯誤頻率(frequency of reference memory errors) ,分別等于工作記憶錯誤或參考記憶錯誤與總的入臂次數的比率。用這兩個指標分別評價工作記憶與參考記憶。同時,計算平均探究時間(average exploration time),即測試時間與總的入臂次數之比,為評價一般運動活性的指標。根據毀損的腦區結構或所給削弱記憶的藥物的不同,工作記憶錯誤頻率和/或參考記憶錯誤頻率顯著增高,記憶增強藥物或治療可使這種錯誤頻率降低。
1. 小鼠放射迷宮設備和實驗程序與大鼠類似,但迷宮規格應比大鼠迷宮小1/4~1/2,以免增加小鼠行為操作難度。
2. 本實驗也可只用來測定工作記憶。方法中唯一不同的是,在所有放射臂均放置食粒,而不是只選4個臂放置食粒。
3. 慢性應激對動物的迷宮操作可產生影響,且存在性別差異。經過慢性應激以后,雄性大鼠記憶力減弱,表現為記憶錯誤頻率增加;雄性大鼠的空間記憶反而增強,表現為錯誤頻率減少。
4. 即使在限制進食條件下,也應讓大鼠體重每周增加5g,以免動物因營養不良而患病。剔除身體狀態不良的動物。
5. 迷宮周圍的任何一件物品均可被動物用來作為空間定為的標志。去除或移動這些標志可能使動物操作困難并降低迷宮臂選擇的準確性。
6. 根據實驗目的的不同迷宮放射臂的數目可不同,包括8、16、24、32、40和48臂迷宮。迷宮臂越少要求動物記住探究過的臂也越小,動物的行為操作就越簡單。增加臂的數目一方面增加了對動物空間記憶的要求,另一方面也引入了更多的、有必要考慮的干擾因素(例如過去的迷宮學習對目前所測記憶的影響)。所以,通常使用8臂放射迷宮,既可減少不必要的、過多臂的干擾,又可縮短訓練和測試所花的時間。
7. 所用食物通常為小塊的、帶巧克力味(動物最喜歡的味道之一)或甜味的早餐圈(每塊10mg);也可用液體食物(如巧克力奶或水)。后者對于測試某些影響動物對固體食物吞咽的藥物(如東###)尤為實用。
8. 影響動物迷宮操作主要有兩大因素:對迷宮或觀察者的恐懼與動物探究習性和已知放在迷宮臂內食物的驅使?謶忠蛩剡^強會阻止動物的迷宮操作,使動物始終停留在迷宮的某一個地方而不去探究。缺乏對食物的渴求也會產生類似結果,增加對動物的撫摸,必要時加高迷宮臂的側墻,有助于減少動物的恐懼。如食物的驅使作用不足,可減少食物量,但必須同時監測體重和一般身體狀況。通常大鼠體重不應低于禁食前的80%;對多數大鼠,體重降低15%即可。
9. 與水迷宮不同,放射臂迷宮適合反復測試或長期記憶的測試。一般認為,工作記憶代表短期記憶,參考記憶代表長期記憶。
八臂迷宮實驗(型號:XR-XB102,上海欣軟)
五、實驗指標參數潛伏期、錯誤次數、正確次數、持續時間、測試次數、軌跡圖、熱圖等,結果輸出excel格式
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