一、擴增流程
         收到產品后，請先根據產品管壁標簽來判斷產品形式，并在擴增前準確查找該質粒菌株的抗性、感受態和培養溫度。
        1、質粒干粉（常溫運輸，存于-20度，90天保質期，請務必轉化挑單克隆培養）
        ①收到質粒干粉后請先5000rpm離心1min，再加入20μl ddH2O去離子水溶解質粒；
        ②取1支100μl 感受態于冰上解凍10min，加入2μl質粒，再冰浴30min后，42℃熱激60s，不要攪動，再冰浴2min；
（從第二步開始均要在超凈工作臺中無菌操作）
        ③加入900μl無抗的LB液體培養基，180rpm震蕩37℃培養45min；
        ④6000rpm離心5min，僅留100μl上清液重懸細菌沉淀，并涂布至目標質粒抗性的LB平板上；
（可使用本平臺的平板涂布專用玻璃珠進行涂布，可以比傳統涂布方法獲得更多轉化子）
        ⑤將平板正向培養1h，再倒置37℃培養14h。如果要求是30度則培養20h；
（如果菌落過多，請將質粒稀釋后再轉化。如果無菌落，請加入10μl質粒離心全涂轉化）
        ⑥挑取單菌落至LB液體培養基中，加入對應抗生素，220rpm震蕩培養14h，根據實驗需要和質粒提取試劑盒說明書提取質粒。
        2、甘油菌種（冰袋運輸，存于-80℃，保質期30天，請務必劃線挑單克隆培養）
四區劃線后挑單菌落培養，酵母菌需要先液體復蘇再四區劃線，再挑單菌落液體培養。
        3、穿刺菌種（冰袋運輸，存于4℃，保質期7天）
穿刺接種，液體培養后四區劃線，再挑單菌落液體培養。
        4、菌落平板（冰袋運輸，存于4℃，保質期7天）
直接挑取單菌落至液體培養基中。
        5、液體質粒（冰袋運輸，存于-20℃，保質期30天）
單獨提取的液體質粒收到后可直接使用。
如需要大題好的質粒，可以下單備注。

降低RNA殘留的方法

   RNA 的去除，首先是使用 RNase 消化。在溶液 I 中加入高濃度的 RNase A (100ug/ml)，或者用含 25ug RNase A/ml TE 溶解抽提好的質粒，都可以降低 RNA 殘留，但都不能徹底去除。幸運的是，RNA 的殘留并不影響酶切等最常用的用途。如果想徹底去除 RNA 殘留，可以用試劑盒，或者使用對 4 個堿基都作用的 RNase。 

降低gDNA殘留的方法

   gDNA 的殘留問題，必須在抽提過程中解決，否則，就只能用膠回收方法處理了。gDNA 越大，越難于復性，也就越容易被去除；所以，一定要盡可能不打斷 gDNA。裂解體系越粘稠，gDNA 越容易被扯斷；操作手法越重，gDNA 也越容易被打斷。溫和操作，使用相對過剩的試劑，是降低 gDNA 殘留的最好方法。

降低蛋白質殘留的方法

   蛋白質的去除，主要是靠不溶解的 K-SDS-蛋白質復合物的形成。雖然將中和后的體系置于 4C 一段時間，可以形成更多的該不溶復合物，從而使蛋白質殘留更少，但實踐證明這樣做并不是必須的，除非是大量抽提。只要加入溶液 I 后的懸浮，加入溶液 II 后的裂解及加入溶液 III 后的中和是均勻徹底的，蛋白質的殘留就應該在可以滿足實驗要求的水平；而只有溶液的用量足夠，甚至過剩，才能確保裂解和中和是徹底的。當然，試劑盒等的使用，是可以更進一步降低蛋白質的殘留的。

降低質粒Nick的方法

   細菌收獲時間，菌株的選擇，抽提操作的劇烈程度是影響 Nick 的三個主要因素。細菌收獲過早，質粒還在復制過程中，Nick 的比例較高；過晚，細菌開始死亡，雜質會比較多。如果使用胞內酶含量很高的宿主菌，會出現較高比例的 Nick。加入溶液 II 及加入溶液 III 的混勻操作，也可以導致一些 Nick，但影響不會比前兩者大。

降低變性超螺旋的方法

   理論上，用堿裂解法抽提質粒，變性超螺旋的出現是不可避免的。  之所以大家沒有非常在意，一是因為它的存在似乎對酶反應沒有任何影響，二是因為它的含量并不一定高到被用電泳觀察到。抽提使用相對過剩的溶液，在加入溶液 II 后，體系能在 1 分鐘內變澄清，再快速加入溶液 III，這樣基本上能將變性超螺旋的出現控制在電泳看不見的水平。 (變性超螺旋電泳時比正常超螺旋跑得快一點點。)

關于質粒多聚體

   QIAGEN 提供了一個沒有進一步解釋的觀察：從有些宿主菌中抽提質粒 (pTZ19)，電泳能發現很多條帶；但使用單酶切后，仍然變成一條帶，大小正好是線性單質粒的大小。根據這一觀察，可以推理如下：那些大的條帶(質粒多聚體)是由完整的單質粒“粘”在一起形成的，而不是我的一條鏈與你的一條鏈復性在一起；第二，這種“粘”只是部分的，否則酶切會有問題；第三，這種“粘”是脆弱的，線性后的剛性足以打破它。如果是這樣，質粒多聚體的出現與質粒的結構及序列有關，可以不管它(也管不了)，因為它不影響酶切，或者說，即使質粒多聚體切不動，也不會影響太大。總之，碰到這種情況，不要簡單地認為有問題，而是應該一步一步往下做，但一定要做完一步，檢測一次，看一看結果與預期的吻合程度。

提高得率的方法

   利用氯霉素抑制染色體的復制，而不抑制質粒的復制這一特點，在低拷貝質粒（如pUC19）的培養過程中添加氯霉素可以大大提高得率。