RORγ1 表達于多種組織，包括肝臟、脂肪、骨骼肌和腎臟。RORγt 主要表達于免疫系統的一些不同類型細胞，是促進 Th17 細胞分化并產生關鍵因子 IL-17，在自身免疫疾病的發生和發展中發揮關鍵作用。目前，RORγt 被認為是抗自身免疫疾病，特別是銀屑病藥物研發的新靶點，RORγt 小分子抑制劑最近幾年已成為學術界乃至國際制藥公司研究的熱點領域，極具開發潛力。

近期，瑞士諾華生物醫學研究中心運用基于片段的藥物篩選和設計策略，發現了新型高活性 RORγt 小分子反向激動劑。其中具有代表性的化合物 9 活性最好，其體外活性數據如圖 1 所示。

圖1. 化合物 9 的結構及體外活性數據（圖片來源：J. Med. Chem.）

首先，研究者針對 RORγt 蛋白采用傳統的計算機虛擬篩選辦法從化合物片段庫中進行篩選。為了獲得小分子片段在靶蛋白中的結合模式，研究者將挑選的片段進行共晶復合物的培養。在獲得的 13 個共晶復合物中，化合物 1 采用質譜親和力測定實驗所得的 IC₅₀ 為 216 μM，晶體復合物結構顯示其可以與靶蛋白中的 F377、H323、Q286 形成重要的氫鍵作用，此外，化合物 1 中的苯環可以與F378的苯環形成邊-面相互作用。最后，氯原子可以與C320的側鏈形成疏水作用。（圖2）在此基礎上，以化合物 1 作為起始分子，利用薛定諤軟件中的 SiteMap工具進行周圍活性位點的預測，通過“片段生長”的策略最終獲得化合物 9（圖3）。

圖2. 化合物 1、RIP140 肽與 RORγt 蛋白（Y264-K518）的共晶復合物（PDB ID: 6FZU）；（圖片來源：J. Med. Chem.）

圖3. 基于片段的藥物設計（圖片來源：J. Med. Chem.）

隨后，對化合物 9 進行體外藥代動力學實驗的研究，結果如圖 4 所示。由于化合物 9 在中性條件下具有較高的親脂性和低水溶性，其 LogD（7.4）>5.7。Caco2 和 PAMPA 實驗表明化合物具有較好的透膜性。體外肝微粒體實驗表明，化合物的清除率低，代謝穩定性好。除此之外，化合物與血漿蛋白具有很高的結合率（>99%）（圖4）。Sprague−Dawley 大鼠體內藥代動力學實驗表明，化合物 9 在 1 mg/kg 注射條件下，T_1/2 為 1.3 h，血漿清除率為 76 mL/min/kg；3 mg/kg口服給藥時，T_max 為 2.7 h，口服生物利用度為 10%。

圖4. 體外藥代動力學數據（圖片來源：J. Med. Chem.）

小M 的小思考：

       近年來，免疫治療進入了一個快速發展的時代，尤其是免疫檢驗點抑制劑在臨床上取得了一定的療效，并展現出廣闊的應用前景^[1-2]。具有代表性的是多個上市的腫瘤免疫藥物，如 PD1/PDL1 單抗、CTLA-4 單抗以及處于臨床試驗階段的 CAR-T 細胞療法。臨床數據顯示，這些療法的聯用或者它們與分子靶向藥物聯合用藥能夠提高臨床應答率并克服腫瘤的耐藥問題^[3-4]。但是，它們同時也存在著很多問題，比如并非所有的腫瘤類型都對免疫治療響應或者患者的響應率比較低，CAR-T 細胞療法也只在血液腫瘤中顯示驚人的療效，未來還需要研究人員不斷的探索。

RORγt 作為一種與自身免疫性疾病密切相關的靶點，其能夠促進 Th17 細胞分化并產生關鍵因子 IL-17，被認為是抗自身免疫疾病，特別是銀屑病藥物研發的新靶點。本文采用計算機虛擬篩選的策略和基于片段的藥物設計策略，發現了高活性 RORγt 反向激動劑，并闡明其作用機制，為開發抗銀屑病藥物提供了重要的參考。

參考文獻

[1] Page, D. B. et al. Immune modulationin cancer with antibodies. Annu. Rev.Med. 2014, 65, 185−202.

[2]Sadelain, M. et al. Therapeutic Tcell engineering. Nature 2017, 545, 423−431.

[3]Garon, E. B. et al. Pembrolizumab for the treatment of non-small-celllung cancer. N. Engl. J. Med. 2015,372,2018–2028.

[4]Larkin, J. et al. Combinednivolumab and ipilimumab or monotherapy in untreated melanoma. N. Engl. J.Med. 2015, 373, 23–34.

[5] Carcache,D. A. et al.Optimizing a WeaklyBinding Fragment into a Potent RORγt Inverse Agonist with Efficacy in an inVivo Inflammation Model.JMed Chem. 2018 doi: 10.1021/acs.jmedchem.8b00529.

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