注    意： 正式測定之前選擇2-3個預期差異大的樣本做預測定。

測定意義：
ACP是一種在酸性環境下催化蛋白質水解的酶。該酶主要用于酒精發酵、啤酒釀造、毛皮軟化、果酒澄清、醬油釀造、飼料等。
 
測定原理：
酸性條件下，ACP催化酪蛋白水解產生酪氨酸；在堿性條件下，酪氨酸還原磷鉬酸化合物生成鎢藍；鎢藍在680nm有特征吸收峰，通過測定其吸光度增加，來計算ACP活性。
 
自備儀器和樣品：
可見分光光度計、水浴鍋、磁力攪拌器、可調式移液槍、1mL玻璃比色皿、1.5 mL EP管和蒸餾水。
 
試劑組成和配置：
液體一：1.5mL×1支，4℃保存。
液體二：1mL×1支，4℃保存。
試劑一的配制：臨用前按液體一：液體二：蒸餾水=76（μL）：17（μL）：18（mL）的比例配制，現配現用，如出現白色絮狀沉淀則不能用。 
試劑二：粉劑×1瓶，4℃保存。臨用前加10 mL蒸餾水溶解。
試劑三：粉劑×1瓶，4℃避光保存。臨用前加入20 mL試劑一，沸水浴中磁力攪拌溶解。（可在燒杯上蓋一層保鮮膜，注意觀察，避免水分全部蒸發，一般加熱15-30分鐘，該試劑為過飽和試劑，充分混勻后仍出現顆粒物不溶物不影響使用）。
試劑四：粉劑×1瓶，4℃保存。臨用前加入50 mL蒸餾水溶解。
試劑五：液體10mL×1瓶，4℃保存。
標準品：液體1mL×1支，0.25 μ mol/mL標準酪氨酸溶液，4℃保存。
 
粗酶液提取：
1.  試劑一的配制：見試劑的組成和配制。
2.  組織：按照組織質量（g）：試劑一體積(mL)為1：5~10的比例（建議稱取約0.1g組織，加入1mL試劑一）冰浴勻漿，8000g，4℃離心10min，取上清，即粗酶液。
3.  血清或培養液：直接測定。
4.  細菌、真菌：按照細胞數量（10⁴個）：試劑一體積（mL）為500~1000：1的比例（建議500萬細胞加入1mL試劑一），冰浴超聲波破碎細胞（功率300w，超聲3秒，間隔7秒，總時間3min）；然后8000g，4℃，離心10min，取上清置于冰上待測。
 
測定操作：
1.分光光度計預熱30min，調節波長到680 nm，蒸餾水調零。
2.試劑二、試劑三和試劑四置于30℃水浴保溫30min。
3. 對照管：取一支EP管，加入100μL粗酶液，200μL試劑二，混勻后置于30℃水浴保溫10min；加入200μL試劑三，混勻后8000g， 4℃離心10min；取200μL上清液，加入新的EP管，再加入1000μL試劑四，200μL試劑五，混勻后置于30℃水浴保溫20min，于680nm測定光吸收，記為A對照管。
4. 測定管：取一支EP管，加入100μL粗酶液，200μL試劑三，混勻后置于30℃水浴保溫10min；加入200μL試劑二，混勻后8000g， 4℃離心10min；取200μL上清液，加入新的EP管，再加入1000μL試劑四，200μL試劑五，混勻后置于30℃水浴保溫20min，于680nm測定光吸收，記為A測定管。（注意與空白管不同，先加試劑三，后加試劑二）
5. 空白管：取EP管，加入200μL蒸餾水，1000μL試劑四，200μL試劑五，混勻后置于30℃水浴保溫20min，于680nm測定光吸收，記為A空白管。
6. 標準管：取EP管，加入200μL標準品，1000μL試劑四，200μL試劑五，混勻后置于30℃水浴保溫20min，于680nm測定光吸收，記為A標準管。
注意：空白管和標準管只需要測定一次。
 
ACP活性計算公式：
1. 按照樣本蛋白濃度計算
ACP活性單位定義：30℃每毫克蛋白每分鐘水解產生1nmol酪氨酸為1個酶活單位。
ACP活性（nmol/min /mg prot）= C標準品×（A測定管－A對照管）÷（A標準管－A空白管）×V反總÷(Cpr×V1)÷T= 125×（A測定管－A對照管）÷（A標準管－A空白管）÷Cpr
2．按照樣本質量計算
ACP活性單位定義：30℃每克樣品每分鐘催化水解產生1 nmol酪氨酸為1個酶活單位。
ACP活性（nmol/min /g鮮重）=C標準品×（A測定管－A對照管）÷（A標準管－A空白管）×V反總÷（W×V1÷V2）÷T= 125×（A測定管－A對照管）÷（A標準管－A空白管）÷W
3. 按照液體體積計算
ACP活性單位定義：30℃每毫升樣品每分鐘催化水解產生1nmol酪氨酸為1個酶活單位。
ACP活性（nmol/min/mL）=C標準品×（A測定管－A對照管）÷（A標準管－A空白管）×V反總÷V1÷T= 125×（A測定管－A對照管）÷（A標準管－A空白管）
按照細胞數量計算
ACP活性單位定義：30℃每10⁴個細胞每分鐘催化水解產生1nmol酪氨酸為1個酶活單位。
ACP活性（nmol/min /10⁴ cell）=C標準品×（A測定管－A對照管）÷（A標準管－A空白管）×V反總÷（細胞數量×V1÷V2）÷T= 125×（A測定管－A對照管）÷（A標準管－A空白管）÷細胞數量
C標準品：0.25 μ mol/mL標準酪氨酸溶液；V反總：酶促反應總體積，0.5mL；Cpr：粗酶液蛋白質濃度（mg/mL）；V1：加入反應體系中粗酶液體積（mL），0.1 mL；V2：提取液總體積（mL），1mL；T：催化反應時間（min），10min；W：樣品質量（g）。
 
注意事項：
1.試劑一按操作指示配制，用多少配多少，出現白色絮狀沉淀則不能用。
2.臨用前配制的試劑配置好后3天內使用完畢。