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破壁機在胞內分枝桿菌破壁制備上的應用

瀏覽次數:3265 發布日期:2022-2-7  來源:官網

引言:分枝桿菌屬( Mycobacterium)是一類細長略彎曲的桿菌,因有分枝生長的趨勢而得名。細胞壁含有大量脂質,主要是分枝菌酸,一般不易著色,若經加溫或延長染色時間而著色后能抵抗強脫色劑鹽酸乙醇的脫色,故又稱抗酸桿菌,且不易破壁。本次實驗ATS破壁機將樣品做兩部分處理,對比破壁結果。

實驗對象 
胞內分枝桿菌

實驗儀器
高速離心機
ATS破壁機
顯微鏡


實驗背景
分枝桿菌屬( Mycobacterium)是一類細長略彎曲的桿菌,因有分枝生長的趨勢而得名。本菌屬的顯著特性為:①細胞壁含有大量脂質;②無鞭毛、無芽胞,也不產生內、外毒素;③對人致病的主要有結核分枝桿菌、牛分枝桿菌、麻風分枝桿菌;④所致感染多為慢性過程,長期遷延并有破壞性的組織病變。

實驗難點
細胞壁含有大量脂質,主要是分枝菌酸,一般不易著色,若經加溫或延長染色時間而著色后能抵抗強脫色劑鹽酸乙醇的脫色,故又稱抗酸桿菌,且不易破壁

實驗目的
將胞內分枝桿菌進行破壁,后續提取蛋白。

實驗工藝
1.預處理:將滅活后的胞內分枝桿菌液體(非結核)分為兩部分,一部分不作處理;一部分做堿處理,離心后去上清加水再重懸。
2.實驗工藝:ATS破壁機搭配一級模塊后,控低溫處理。


實驗結果
A.未處理的菌液破壁結果
通過對菌液進行抗酸染色后觀察,破壁前菌液呈紫色,在破壁次數相同的條件下,隨著壓力的增高,胞內分枝桿菌顏色偏向藍色。

 

100倍油鏡顯示,壓力越高,破壁效果越好。(壓力排序:A<B<C<D)

破壁前

破壁后

B.堿處理菌液破壁結果
同壓力同次數下,堿處理后的菌液破壁效果明顯提高。

   

           (堿處理)                                              (未處理)


實驗小結
1.從染色結果和顯微鏡觀察結果可以看出,未處理的菌液經不同壓力處理后,都有一定程度的細菌破壁,且壓力越高,破壁效果越好。
2.堿處理有助于破壁,比同壓力未處理的菌液破壁結果更好,細胞更細碎。
發布者:安拓思納米技術(蘇州)有限公司
聯系電話:400-998-7088
E-mail:chenglin@duoningbio.com

標簽: 細胞破壁
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