您是否總是遇到細(xì)胞抱團(tuán)的現(xiàn)象？

您是否總是因?yàn)楦悴磺宄��?xì)胞抱團(tuán)原因而困惑？

您是否總是因?yàn)殡y以將抱團(tuán)細(xì)胞拯救回來而抓狂？

伙伴們，我來拯救你們的細(xì)胞了，今天我給大家從四個(gè)層面剖析細(xì)胞抱團(tuán)的真實(shí)原因，快來圍觀吧！

 

Ⅰ

# 細(xì)胞本身生長特性有抱團(tuán)傾向 #

 

有些細(xì)胞本身有抱團(tuán)生長的特性，給大家看5種喜歡抱團(tuán)的細(xì)胞類型：
 

細(xì)胞類型①：NCI-H716 人結(jié)直腸腺癌細(xì)胞

形態(tài)：淋巴母細(xì)胞樣

生長特性：懸浮生長

圖源網(wǎng)絡(luò)，僅供參考學(xué)習(xí)使用

細(xì)胞喜歡在懸浮液中呈葡萄狀聚集，抱團(tuán)細(xì)胞粒粒飽滿

 

細(xì)胞類型②：Caco-2人結(jié)直腸腺癌細(xì)胞

形態(tài)：上皮樣

生長特性：貼壁生長

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此細(xì)胞喜歡貼壁成片分布，呈融合狀，細(xì)胞個(gè)頭大小不勻

 

細(xì)胞類型③：CaLu-3 人肺癌細(xì)胞

形態(tài)：上皮樣

生長特性：貼壁生長

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此細(xì)胞也是喜歡聚集分布，呈片狀，片狀之間有空白

 

 

細(xì)胞類型④：SH-SY5Y人神經(jīng)母細(xì)胞瘤細(xì)胞

形態(tài)：上皮樣

生長特性：貼壁和懸浮生長

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此細(xì)胞貼壁居多，有輕微的抱團(tuán)傾向

 

細(xì)胞類型⑤：BT-474人乳腺癌細(xì)胞

形態(tài)：上皮樣

生長特性：貼壁、片狀生長

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此細(xì)胞也是喜歡片狀生長

 

 

看了這么多喜歡抱團(tuán)的細(xì)胞類型，也會(huì)有喜歡分散生長的細(xì)胞類型吧，來給大家展示2種細(xì)胞類型：
 

細(xì)胞類型①：MSC（人源脂肪來源）

形態(tài)：成纖維樣

生長特性：貼壁生長

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此細(xì)胞成纖維樣，均勻分布，平鋪皿底，不留空隙

 

 

細(xì)胞類型②：HEF小兒包皮成纖維細(xì)胞（人源脂肪來源）

形態(tài)：成纖維樣

生長特性：貼壁生長

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此細(xì)胞也是喜歡分散生長，均勻分布

 

 

看了這些細(xì)胞形態(tài)，不知您是否和我有一個(gè)共鳴：大多數(shù)上皮樣或神經(jīng)母細(xì)胞瘤樣的細(xì)胞更喜歡抱團(tuán)生長，而大多數(shù)成纖維樣細(xì)胞更喜歡分散、均勻生長。

 

又有一個(gè)問題來了，那就是我們?nèi)绾螀^(qū)分細(xì)胞抱團(tuán)正不正常。

這里開始劃重點(diǎn)了，大家看好了：

    1.  如果細(xì)胞本身是分散生長，結(jié)果抱團(tuán)嚴(yán)重，說明細(xì)胞“生病”了，我們要給細(xì)胞“診治”。

    2.  如果本身生長特性就有抱團(tuán)的細(xì)胞，如何判斷它的抱團(tuán)正不正常呢？

 

獨(dú)門秘訣告訴您，細(xì)胞哪怕是抱團(tuán)了，也是“粒粒飽滿，棱角分明”的，回頭看看上面抱團(tuán)的細(xì)胞，是不是細(xì)胞之間有明確的“分界線”，這說明它們抱在一起很健康，很Happy；而異常的細(xì)胞抱團(tuán)，你是觀察不到細(xì)胞之間的“界限”的，細(xì)胞形態(tài)也不規(guī)則，邊緣模糊，遠(yuǎn)遠(yuǎn)看去，抱團(tuán)的細(xì)胞像“一團(tuán)漿糊”。

 

 

Ⅱ

# 細(xì)胞老化更容易抱團(tuán) #

細(xì)胞類型：MSC(人源臍帶來源第6代）

形態(tài)：成纖維樣

生長特性：貼壁生長

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如圖所示：

人臍帶來源第6代的間充質(zhì)干細(xì)胞，白色箭頭指示的是發(fā)生細(xì)胞老化的MSC細(xì)胞，β-半乳糖苷酶染色陽性，染上藍(lán)色。

由圖片可以看出老化細(xì)胞體積增大、細(xì)胞扁平。白圈圈起來的是聚團(tuán)細(xì)胞，老化細(xì)胞容易聚團(tuán)生長，狀態(tài)變差。

 

 

Ⅲ

# 血清批間差可能導(dǎo)致細(xì)胞抱團(tuán) #

那么問題來了，血清為何有批間差？

因?yàn)檠�清來源于�?dòng)物，其組成成分有1000種左右，且血清組成及含量常隨供血?jiǎng)游锏哪挲g、生理?xiàng)l件和營養(yǎng)條件而異。每個(gè)批號(hào)的組分百分比含量都是不固定的，所以批間差異是存在的。

H9c2 低密度正常形態(tài)

舊批次血清

H9c2 低密度抱團(tuán)形態(tài)

新批次血清

舊批次血清

H9c2高密度異常形態(tài)

新批次血清

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血清批間差可能會(huì)導(dǎo)致細(xì)胞抱團(tuán)。

如圖所示，大鼠心肌細(xì)胞在更換了新批次的血清之后，隨著傳代次數(shù)的增加，抱團(tuán)明顯。正常低密度下，細(xì)胞舒展開來，均勻分散，但異常的的細(xì)胞會(huì)呈現(xiàn)聚集生長狀態(tài)，高密度下正常細(xì)胞像鋪路石一樣均勻鋪滿，不留空隙，但高密度下異常的細(xì)胞，形態(tài)模糊，難以辨認(rèn)，像四川九寨溝一樣的溝壑重生。

 

Ⅳ

# 胰酶消化不當(dāng)容易導(dǎo)致細(xì)胞抱團(tuán) #

HEK293細(xì)胞

 

導(dǎo)致細(xì)胞抱團(tuán)的第一種情況是胰酶消化操作不當(dāng)。

如果您經(jīng)常遇到傳代的細(xì)胞貼壁后老是貼壁不勻，成片分布，抱團(tuán)生長，來看看你有沒有注意這幾個(gè)細(xì)節(jié)噢。

1.  如圖所示，HEK 293因消化過度或吹打過猛導(dǎo)致細(xì)胞受傷嚴(yán)重，破損的細(xì)胞碎片容易粘連抱團(tuán)；
2.  消化時(shí)細(xì)胞融合率太高，成片脫落，將不容易被吹散，容易抱團(tuán)，我們建議細(xì)胞融合率達(dá)到80%傳代為佳；
3.  吹打力度不足，難以將成片脫落的細(xì)胞吹散，容易抱團(tuán)。  

導(dǎo)致細(xì)胞抱團(tuán)的第二種情況是細(xì)胞對(duì)胰酶消化強(qiáng)度和純度的敏感性。

1.  細(xì)胞對(duì)胰酶消化強(qiáng)度的敏感性。絕大多數(shù)細(xì)胞都可以適應(yīng)普通胰酶（貨號(hào)：03-050-1B：0.25%胰蛋白酶,0.02%EDTA）。這里的EDTA能螯合掉培養(yǎng)液中的Ca²⁺、Mg²⁺，加快細(xì)胞與皿底以及細(xì)胞之間的分離速度。但有極少部分細(xì)胞對(duì)胰酶消化強(qiáng)度很敏感，需要不含EDTA的胰蛋白酶（貨號(hào)：03-046-1B：0.025%胰蛋白酶,不含EDTA），例如：大鼠肺泡二型上皮細(xì)胞。
2.  細(xì)胞對(duì)胰酶純度的敏感性。胰蛋白酶主要是從豬的胰臟提取，純化獲得的結(jié)晶，再制成的凍干制劑。正是因?yàn)槠涫翘崛∥铮�故純度無法媲美重組胰酶，含有的雜酶比如羧肽酶對(duì)細(xì)胞有傷害，敏感的細(xì)胞類型如神經(jīng)元類：小鼠海馬神經(jīng)元HT22；干細(xì)胞類：胚干，誘導(dǎo)干；間充質(zhì)干需要用重組胰酶（貨號(hào)：03-079-1B）消化。  

我們可以看一個(gè)例子：

用重組胰酶和普通含EDTA的0.25%胰酶消化間充質(zhì)干細(xì)胞，重組胰酶消化的細(xì)胞生長分布均勻，狀態(tài)良好，形態(tài)飽滿，邊緣清晰；而普通胰酶消化的細(xì)胞則明顯抱團(tuán)，狀態(tài)很差，形態(tài)扁平，邊緣迷糊，并形成大小不一的孔狀。所以如果您養(yǎng)的細(xì)胞出現(xiàn)抱團(tuán)，不妨嘗試一下重組胰酶哦。

​

本期講解就到這里了，關(guān)于細(xì)胞抱團(tuán)，是不是戳中了您養(yǎng)的細(xì)胞抱團(tuán)的一種可能？

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